目前國(guó)際上zui流行的免疫檢測(cè)擬合方式是 四參數(shù)邏輯擬合 ，用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線(xiàn)關(guān)系，從而進(jìn)一步比較正確的獲得樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度值。
   其實(shí)，在一個(gè)長(zhǎng)的區(qū)間內(nèi)，Logistic應(yīng)該都能擬合得較為理想。但并不是說(shuō)它就是的。事實(shí)上不僅是ELISA，其它很多生物學(xué)反應(yīng)都是S形曲 線(xiàn)，也都可以用Logistic曲線(xiàn)擬合。但建模型是一回事，而用它來(lái)定量是另一回事。如果用來(lái)定量，S形曲線(xiàn)的中間段（較陡處）是比較好的，而兩端的平 坦部分計(jì)算誤差會(huì)大，有時(shí)甚至?xí)艽蟆?br> 做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品檢測(cè)時(shí)有幾個(gè)問(wèn)題需要注意：
1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出來(lái)的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)從談起。
2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度zui陡段，即曲線(xiàn)幾乎成直線(xiàn)的范圍內(nèi)。
3、zui好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。
4、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對(duì)低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。
5、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來(lái)說(shuō)，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對(duì)于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999.