熒光分光光度計能夠對經(jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析，可應用于生物化學、生物醫(yī)學、環(huán)境化工等部門，可以說是有很重要的用途。

熒光分光光度計能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數(shù)的測定， 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化， 從而闡明分子結構與功能之間的關系。

熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。

熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡單等優(yōu)點，可對經(jīng)光源激發(fā)后能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或驚化學處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)進行定量分析，被廣泛應用于食品檢測、水質(zhì)分析、生命科學、藥物分析和藥理學、有機化學和無機化學等領域。

激發(fā)光譜，就是反映物質(zhì)受到激發(fā)以后的情況，反映出該物質(zhì)對于外來激發(fā)光的響應，反映其自身輻射波長隨激發(fā)波長的變化關系。激發(fā)光譜有重要的應用價值，例如日光燈燈管中水銀蒸氣發(fā)出的紫外線能量的90%集中在254nm,就得選擇激發(fā)光譜峰值在此附近的熒光粉。

在激發(fā)光譜中，橫坐標的波長是指激發(fā)光的波長；（激發(fā)光譜是反映某物質(zhì)在不同波長光激發(fā)下的發(fā)光情況的，縱坐標值越高，說明發(fā)光越強，能量也越高）。

量子產(chǎn)率是指光化學反應中光量子的利用率。一個光化學反應的量子產(chǎn)率可以定義為每吸收一個量子所產(chǎn)生的反應物的分子數(shù)，這通常是對于特定的波長而言，即量子產(chǎn)率=（生成產(chǎn)物的分子數(shù)）/（吸收的量子數(shù)）

定義為進行光化學反應的光子與吸收總光子數(shù)之比。符號為ψ，Y。積分量子產(chǎn)率為Ф進行光化學反應的光子數(shù)/吸收光子數(shù)。對于光化學反應，ψ=反應物消耗(或產(chǎn)物產(chǎn)生)的數(shù)量/吸收光子數(shù)量。微分量子產(chǎn)率為φ=(d[x]/dt)/n。式中d[x]/dt為某可測量量的變率，n為單位時間內(nèi)所吸收的光子數(shù)(摩爾或愛因斯坦)。ψ可用于光物理過程或光化學反應。

當某種物質(zhì)被一束激光激發(fā)后，該物質(zhì)的分子吸收能量后從基態(tài)躍遷到某一激發(fā)態(tài)上，再以輻射躍遷的形式發(fā)出熒光回到基態(tài)。當去掉激發(fā)光后，分子的熒光強度降到激發(fā)時的熒光最大強度I0的1/e所需要的時間，稱為熒光壽命，常用τ表示。

熒光物質(zhì)的熒光壽命與自身的結構、所處微環(huán)境的極性、粘度等條件有關,因此通過熒光壽命測定可以直接了解所研究體系發(fā)生的變化。熒光現(xiàn)象多發(fā)生在納秒級,這正好是分子運動所發(fā)生的時間尺度,因此利用熒光技術可以“看”到許多復雜的分子間作用過程,例如超分子體系中分子間的簇集、固液界面上吸附態(tài)高分子的構象重排、蛋白質(zhì)高級結構的變化等。

除了直接應用之外,熒光壽命測定還是其它時間分辨熒光技術的基礎。例如基于熒光壽命測定的熒光猝滅技術可以研究猝滅劑與熒光標記物或探針相互靠近的難易,從而對所研究體系中探針或標記物所處微環(huán)境的性質(zhì)作出判斷。

根據(jù)激發(fā)態(tài)壽命理論，物質(zhì)的熒光壽命主要由自發(fā)輻射躍遷壽命和無輻射躍遷壽命來決定。自發(fā)輻射壽命與溫度無關，但對環(huán)境的擾動敏感。在環(huán)境擾動下，例如，和體系的任何其它分子碰撞，體系可能通過非輻射過程失去其電子的激發(fā)能量。任何一種趨于和自發(fā)發(fā)射過程相競爭的過程都會降低激發(fā)態(tài)壽命。

熒光偏振免疫分析常用于測定半抗原的藥物濃度。反應系統(tǒng)內(nèi)除待測抗原外，同時加入一定量用熒光素標記的小分子抗原，使二者與有限量的特異性大分子抗體競爭結合。當待測抗原濃度高時，經(jīng)過競爭反應，大部分抗體被其結合，而熒光素標記的抗原多呈游離的小分子狀態(tài)。

由于其分子小，在液相中轉動速度較快，測量到的熒光偏振程度也較低。反之，如果待測抗原濃度低時，大部分熒光素標記抗原與抗體結合，形成大分子的抗原抗體復合物，此時檢測到的熒光偏振程度也較高。熒光偏振程度與待測抗原濃度呈反比關系。我們測定待測抗原標準品后制標準曲線。通過檢測反應系中偏振光的大小，從標準曲線上就可以精確地得知樣品中待測抗原的相應含量

偏振熒光的強弱程度與熒光分子的大小呈正相關，與其受激發(fā)時轉動的速度呈反相關。FPIA最適宜檢測小至中等分子物質(zhì)，常用于藥物、激素的測定。