免疫印跡（immunoblotting）又叫做蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是通過(guò)抗原抗體的特異性結(jié)合來(lái)對(duì)復(fù)雜樣品中的某種蛋白進(jìn)行檢測(cè)的方法。此方法是一種新的免疫生化技術(shù)，其是基于凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展出來(lái)的。如今免疫印跡已經(jīng)成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)，因?yàn)槠浼染邆涔滔嗝庖邷y(cè)定的高特異性和敏感性，又具備SDS-PAGE 的高分辨力。某種蛋白的鑒定一般使用免疫印跡，并且可以定性和半定量分析蛋白。和化學(xué)發(fā)光相結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)，能夠同時(shí)對(duì)多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異進(jìn)行比較。

優(yōu)點(diǎn)

免疫印跡法是一項(xiàng)對(duì)抗原、抗體進(jìn)行分析的技術(shù)。其具備如下優(yōu)點(diǎn)。

1.孵育、洗滌的時(shí)間減短非常明顯。

2.為了用于多種分析和鑒定，能夠同時(shí)制作多個(gè)拷貝。

3.以圖譜形式顯示結(jié)果，能夠長(zhǎng)期保存結(jié)果。

4.免疫探針能夠利用將PH值降低等方法抹掉探針，用第二探針替換來(lái)進(jìn)行進(jìn)行分析檢測(cè)。

5.濕的固定化基質(zhì)膜柔韌，操作簡(jiǎn)單便捷。

6.固定化的生物大分子能夠均一地接近各種免疫探針，孔徑不會(huì)對(duì)其起阻隔作用。

7.免疫印跡分析所需的試劑量較少。

基本原理

在凝膠板上單向或雙向電泳分離混合抗原樣品，之后取固定化基質(zhì)膜與凝膠相貼。凝膠中的單一抗原組在印跡紙的自然吸附力、電場(chǎng)力或其它外力作用下往印跡紙上轉(zhuǎn)移并且固相化，Z后應(yīng)用如免疫同位素探針或免疫酶探針等免疫覆蓋液技術(shù)檢測(cè)和分析抗原固定化基質(zhì)膜。

基本步驟

抗原分離、抗原印跡和抗原檢定為免疫印跡法（ 以抗原分析為例）的三個(gè)基本步驟。因?yàn)槊恳徊讲捎貌煌膶?shí)驗(yàn)方法，能夠使多種免疫印跡分析系統(tǒng)構(gòu)成。

2005-08-23 715次 熱門標(biāo)簽： 免疫印跡法臨床應(yīng)用免疫印跡法操作步驟 上一篇