熒光顯微鏡在生物學(xué)的應(yīng)用-怎么選擇光學(xué)儀器

免疫熒光顯微鏡

免疫熒光顯微術(shù)是將光學(xué)顯微鏡加以改造以對(duì)熒光化合物(fluores-
cent compound)所放出的光進(jìn)行觀察。熒光化合物是對(duì)某一波長(zhǎng)的
光[激發(fā)波長(zhǎng)(excitation wavelength)可以吸收，

并發(fā)出較長(zhǎng)波長(zhǎng)[發(fā)
射波長(zhǎng)(emission wavelength)]的光。在熒光顯微術(shù)中最常用的化合
物是羅丹明(rhodamine)發(fā)射紅光;熒光素(fluorescein)發(fā)射綠色光。
首先，熒光化合物與抗體進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)，該抗體對(duì)觀測(cè)對(duì)象細(xì)胞中的
特定蛋白質(zhì)或大分子是特異的

。然后將熒光標(biāo)記的抗體
加到組織切片上，或可透光的細(xì)胞上，并用激發(fā)波長(zhǎng)照射標(biāo)本，在標(biāo)
本中已經(jīng)結(jié)合上抗體的結(jié)構(gòu)即可見到。熒光顯微術(shù)還可應(yīng)用于活細(xì)
胞，它可對(duì)細(xì)胞和細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)的運(yùn)動(dòng)隨著時(shí)間進(jìn)行觀察

共聚焦顯微術(shù)
共聚焦掃描顯微術(shù)是標(biāo)準(zhǔn)免疫熒光顯微術(shù)的改進(jìn)型，可得到全細(xì)胞
或較大樣本更為清晰的映像。在標(biāo)準(zhǔn)免疫熒光顯微術(shù)中，化合物發(fā)
射的熒光來自焦平面(plane of focus)上下兩側(cè)的分子，因而使映像
模糊不清，難以確定真實(shí)的三維分子排列。使用共聚焦掃描顯微鏡
時(shí)，只有處于焦平面的分子才發(fā)出熒光，這是由于使用了聚焦的激發(fā)
波長(zhǎng)激光束(laser beam).激光束在標(biāo)本的各個(gè)不同部分移動(dòng)，并在
不同深度上透過樣木得到一系列映像。然后這些映像經(jīng)過計(jì)算機(jī)綜
合處理，即可得到完整的三維映像。

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