傳統(tǒng)的熒光顯微技術(shù)

  在熒光顯微技術(shù)中，光譜由特定波長(zhǎng)的光產(chǎn)生。熒光顯微鏡可使未
混有激發(fā)光的發(fā)射光的透射最大化，激發(fā)光的強(qiáng)度比發(fā)射光大得多。傳
統(tǒng)的熒光顯微鏡開(kāi)始只用于固定的細(xì)胞。

  檢測(cè)熒光在活細(xì)胞內(nèi)分布的照相技術(shù)由于感光乳劑對(duì)低水平光的敏
感性低而嚴(yán)重受限，這樣，長(zhǎng)時(shí)間曝光導(dǎo)致暫時(shí)清晰度較低，并可能造
成對(duì)細(xì)胞的光力學(xué)損傷和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)偽跡。將熒光顯微技術(shù)與視頻圖像處
理系統(tǒng)結(jié)合，克服了這些困難，擴(kuò)展了用熒光技術(shù)探測(cè)活細(xì)胞的使用范
圍。由于視頻的速度和敏感性較高，可以實(shí)時(shí)觀測(cè)并記錄熒光強(qiáng)度和分
布的快速變化。

  傳統(tǒng)熒光顯微鏡技術(shù)有一個(gè)缺點(diǎn)是產(chǎn)生視野深度很小的圖像。由于光
學(xué)顯微鏡的分辨度是0.2 μm ，在2~3 um厚的焦距范圍內(nèi)添加這么小的
圖像會(huì)使結(jié)構(gòu)顯得模糊。對(duì)于超過(guò)10μm 厚的樣品，焦距以外來(lái)的光也
能使圖像衰變，在所研究的結(jié)構(gòu)周圍產(chǎn)生一個(gè)彌散的暈輪。焦距外熒光
降低了對(duì)比度和清晰度。結(jié)合使用差異干涉相差顯微技術(shù)和超低光水平
敏感視頻檢測(cè)儀使人們能較長(zhǎng)時(shí)間在活細(xì)胞內(nèi)觀測(cè)熒光，而光力學(xué)損傷
和染料漂白都達(dá)到最低，且能提高清晰度。但是，去除焦距外熒光的最
好途徑是用共聚焦顯微技術(shù)。

(本文由上海光學(xué)儀器廠編輯整理提供, 未經(jīng)允許禁止復(fù)制,轉(zhuǎn)載須注明網(wǎng)址http://www.sgaaa.com)