11月15日，學(xué)術(shù)期刊《蛋白質(zhì)與細(xì)胞》(Protein & Cell)以來(lái)信(Letter)形式在線發(fā)表了一篇題為“關(guān)于NgAgo的疑問(wèn)(Questions about NgAgo)”的文章，由國(guó)內(nèi)外20家實(shí)驗(yàn)室的負(fù)責(zé)人聯(lián)合署名，對(duì)河北科技大學(xué)副教授韓春雨等人發(fā)表在《自然-生物技術(shù)》(Nature Biotechnology)的論文結(jié)果提出質(zhì)疑，表示無(wú)法重復(fù)韓春雨的NgAgo實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

備受關(guān)注的NgAgo可重復(fù)性爭(zhēng)議日前有了新進(jìn)展。

　　這20位作者名單中，有17位是國(guó)內(nèi)學(xué)者，其中包括10月10晚實(shí)名發(fā)聲“未能重復(fù)韓春雨實(shí)驗(yàn)”并呼吁第三方介入調(diào)查的11位科學(xué)家(谷峰、黃志偉、李勁松、王皓毅、李偉、孫育杰、魏文勝、吳強(qiáng)、王曉群、熊敬維、楊輝)，另有三位科學(xué)家在國(guó)外機(jī)構(gòu)任職，包括美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院人類基因組研究所資深研究員Shawn Burgess、美國(guó)約翰霍普金斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院教授程臨釗以及美國(guó)加州大學(xué)洛杉磯分校教授林碩。

　　《蛋白質(zhì)與細(xì)胞》(Protein & Cell)由高等教育出版社、北京生命科學(xué)院和中國(guó)生物物理學(xué)會(huì)2010年聯(lián)合創(chuàng)辦，清華大學(xué)教授、中科院院士饒子和擔(dān)任主編。

　　20位科學(xué)家稱實(shí)驗(yàn)無(wú)法重復(fù)，已排除細(xì)胞污染

　　今年5月12日，韓春雨團(tuán)隊(duì)在《自然-生物技術(shù)》發(fā)表的文章顯示，DNA介導(dǎo)的基因編輯工具NgAgo可以在哺乳動(dòng)物基因組的47個(gè)位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)100%的基因編輯，效率為21.3%-41.3%。

　　在《蛋白質(zhì)與細(xì)胞》發(fā)表的這篇來(lái)函文章中，署名的20位作者指出，他們?cè)诓煌募?xì)胞系以及小鼠、斑馬魚等系統(tǒng)中對(duì)NgAgo的基因編輯活性進(jìn)行了測(cè)試，但沒(méi)有一個(gè)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)NgAgo能夠?qū)崿F(xiàn)韓春雨論文中所稱的基因組DNA的編輯。之后，一些作者轉(zhuǎn)而使用韓春雨使用的或提供的質(zhì)粒進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，“再一次，內(nèi)源基因組DNA的編輯沒(méi)有成功”。

　　作者們對(duì)韓春雨論文中的圖4結(jié)果也進(jìn)行了獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在293T細(xì)胞中選擇了韓春雨論文報(bào)告的相同基因進(jìn)行測(cè)試。“幾個(gè)不同實(shí)驗(yàn)室的研究者獨(dú)立完成了他們的實(shí)驗(yàn)，但在靶向位點(diǎn)沒(méi)有觀察到任何Indels。”文章寫道。Indel是分子生物學(xué)中的一個(gè)術(shù)語(yǔ)，是“insertion”(插入)和“deletion”(缺失)兩個(gè)單詞的縮寫，指的是在DNA中的核苷酸插入或缺失。因?yàn)镹gAgo實(shí)現(xiàn)編輯基因的結(jié)果為插入或缺失Indel，無(wú)法觀察到Indel就被認(rèn)為不符合預(yù)期結(jié)果。

　　文章的補(bǔ)充材料中還包括署名作者們?cè)诓煌到y(tǒng)中嘗試NgAgo的結(jié)果，“這些研究沒(méi)有一個(gè)證明NgAgo有基因組編輯的活性”。

　　此前，韓春雨曾多次在接受媒體采訪時(shí)稱，重復(fù)不出來(lái)的實(shí)驗(yàn)室可能存在“細(xì)胞污染”等問(wèn)題。作者們表示，不可能所有的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室都出現(xiàn)細(xì)胞污染，“事實(shí)上，多位署名作者的實(shí)驗(yàn)室在做重復(fù)實(shí)驗(yàn)之前，都會(huì)首先檢測(cè)細(xì)胞，確保它們不受支原體的污染?！?p>

　　文章還指出，他們?cè)谥貜?fù)韓春雨論文中圖3c的結(jié)果時(shí)，確實(shí)在轉(zhuǎn)染NgAgo和靶向GFP(綠色熒光蛋白)后看到GFP表達(dá)下降，但是并無(wú)法通過(guò)測(cè)序證實(shí)這是DNA突變的結(jié)果。“很多因素都可以影響到GFP的表達(dá)，比如NgAgo靶向DNA的能力，以及轉(zhuǎn)染造成的非特異性應(yīng)激(non-specific stress)等。”作者們?cè)谖恼轮薪忉屨f(shuō)。

　　此外，韓春雨曾在多次報(bào)告中稱NgAgo實(shí)驗(yàn)需要“高超的實(shí)驗(yàn)技巧”，但20位作者的質(zhì)疑文章反駁了這一說(shuō)法——“無(wú)論是論文最初刊發(fā)的實(shí)驗(yàn)流程還是在Addgene網(wǎng)站發(fā)布的最新信息，這些步驟似乎都不需要 高超的實(shí)驗(yàn)技巧 ?！辈糠肿髡呱踔僚蓪W(xué)生到韓春雨的實(shí)驗(yàn)室拜訪學(xué)習(xí)，但在此期間，他們都未獲允許操作哺乳動(dòng)物基因組編輯的實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果就是，沒(méi)有一個(gè)學(xué)生得到證實(shí)韓春雨數(shù)據(jù)的信息。

　　在文章最后，作者們表示，希望原始論文的作者們能夠澄清有關(guān)NgAgo的疑點(diǎn)，提供所有的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)以重復(fù)其最初的結(jié)果。

　　據(jù)文章的通訊作者之一、北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院研究員魏文勝介紹，他們?cè)?0月中旬將這篇文章投給最初發(fā)表NgAgo論文的《自然-生物技術(shù)》，但《自然-生物技術(shù)》在此之前已收到一篇類似的文章，20位科學(xué)家遂轉(zhuǎn)投《蛋白質(zhì)與細(xì)胞》，文章得以快速評(píng)審并發(fā)表。

　　韓春雨最新回應(yīng)：再次重復(fù)成功

　　此前，韓春雨曾向《知識(shí)分子》表示，科學(xué)的問(wèn)題要通過(guò)科學(xué)的方法去解決，“第二篇文章(關(guān)于NgAgo的文章)出來(lái)之前，這種質(zhì)疑聲音始終都會(huì)在的，不可能通過(guò)幾次報(bào)道，就解決問(wèn)題的?！? 學(xué)術(shù)期刊《細(xì)胞研究》(Cell Research)常務(wù)副主編李黨生博士也曾向《知識(shí)分子》表示，科學(xué)上的爭(zhēng)議的最終解決只能靠科學(xué)共同體的進(jìn)一步驗(yàn)證。

　　面對(duì)《蛋白質(zhì)與細(xì)胞》在線發(fā)表的針對(duì)NgAgo可重復(fù)爭(zhēng)議的文章，韓春雨在11月16日下午回應(yīng)《知識(shí)分子》稱，(質(zhì)疑)文章的具體內(nèi)容他還沒(méi)有看，但他的實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)再次重復(fù)實(shí)驗(yàn)并成功，只是“細(xì)胞需要處理才能做”。然而，韓春雨拒絕透露處理細(xì)胞的詳情，稱“這個(gè)處理還沒(méi)有完善，如果要發(fā)文章，做出回應(yīng)(correspondence)，還需要把這個(gè)東西進(jìn)一步明確”。

　　韓春雨說(shuō)，他還找了兩家實(shí)驗(yàn)室，按照他確定的方法能做出來(lái)。但是他不愿意透露這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室的名字。

　　懸疑：“誰(shuí)來(lái)調(diào)查這件事情?”

　　在學(xué)術(shù)期刊上發(fā)表針對(duì)已有研究工作的質(zhì)疑是解決學(xué)術(shù)爭(zhēng)議的重要一步，但是有關(guān)韓春雨實(shí)驗(yàn)是否可以重復(fù)，當(dāng)前出現(xiàn)了尖銳對(duì)立的兩種觀點(diǎn)一直無(wú)法得到澄清?！叭绻荒苤貜?fù)，這究竟是一種誠(chéng)實(shí)的錯(cuò)誤，還是一種學(xué)術(shù)不端行為，現(xiàn)在依然不清楚”，中科院科技政策研究所研究員李真真對(duì)《知識(shí)分子》表示，“誰(shuí)來(lái)調(diào)查這件事情?這么巨大爭(zhēng)議的問(wèn)題現(xiàn)在沒(méi)人管，說(shuō)明我們國(guó)家的科學(xué)共同體應(yīng)對(duì)此類問(wèn)題還很不成熟?！?p>　　20位署名作者名單

　　Shawn Burgess，美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院人類基因組研究所資深研究員;

　　程臨釗，約翰霍普金斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院教授;

　　谷峰，溫州醫(yī)科大學(xué)眼視光學(xué)院研究員;

　　黃軍就，中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院教授;

　　黃志偉，哈爾濱工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院教授;

　　林碩，加州大學(xué)洛杉磯分校分子、細(xì)胞與發(fā)育生物學(xué)系教授;

　　李勁松，中科院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所研究員;

　　李偉，中科院北京動(dòng)物所研究員;

　　秦偉，北京大學(xué)深圳研究院教授;

　　孫育杰，北京大學(xué)生物動(dòng)態(tài)光學(xué)成像中心研究員;

　　松陽(yáng)洲，中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院教授;

　　魏文勝，北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院、生物動(dòng)態(tài)光學(xué)成像中心研究員;

　　吳強(qiáng)，上海交通大學(xué)系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究院教授;

　　王皓毅，中科院北京動(dòng)物研究所研究員;

　　王曉群，中科院生物物理研究所研究員;

　　熊敬維，北京大學(xué)分子醫(yī)學(xué)研究所研究員;

　　席建忠，北京大學(xué)工學(xué)院研究員;

　　楊輝，中科院上海神經(jīng)生物學(xué)研究所研究員;

　　周斌，中科院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所研究員;

　　張博，北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院教授。

　　參考文獻(xiàn)：

　　1。 Burgess， S。， Cheng， L。， Gu， F。 et al。 Protein Cell (2016)。 doi：10.1007/s13238-016-0343-9

　　2。 Gao， Feng， et al。 “DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute?！?Nature Biotechnology (2016)。