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電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺的手段

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2022-10-31  瀏覽次數(shù):580
核心提示:  事實證明,在科學(xué)飛速發(fā)展的今天,無論我們從事什么領(lǐng)域的研究,除了有良好的理論基礎(chǔ)外,更重要的是依靠先進(jìn)的技術(shù)、優(yōu)秀的

  事實證明,在科學(xué)飛速發(fā)展的今天,無論我們從事什么領(lǐng)域的研究,除了有良好的理論基礎(chǔ)外,更重要的是依靠先進(jìn)的技術(shù)、優(yōu)秀的儀器設(shè)備和良好的研究環(huán)境。除了一般生物實驗室的傳統(tǒng)儀器外,標(biāo)準(zhǔn)分子生物實驗室還有一些特殊用途的儀器。這些儀器通常精確且昂貴。以下是這些儀器的使用方法和注意事項。


  一、冷凍離心機(jī)


  低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究的重要手段。基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其他生物樣品的分離和制備實驗與低溫離心技術(shù)是不可分割的,因此低溫冷凍離心機(jī)已成為分子生物學(xué)研究的重要儀器。在中國,有許多制造商生產(chǎn)冷凍離心機(jī),實驗室的高速冷凍離心機(jī)是GL-20G-Ⅱ類型(上海安亭),落地式。配角轉(zhuǎn)頭:6.×50ml,12×10ml和12×1.5ml。極限轉(zhuǎn)速20000rpm。


  1.安裝和調(diào)試


  離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅實的地面上,距離至少10分鐘cm在通風(fēng)良好的環(huán)境中,周圍空氣應(yīng)為中性,無導(dǎo)電粉塵、易燃?xì)怏w和腐蝕性氣體,環(huán)境溫度應(yīng)為0~30℃兩者之間,相對濕度小于80%。試運行前,打開蓋門,用手移動旋轉(zhuǎn)軸,輕巧靈活。只有在沒有異?,F(xiàn)象的情況下才能使用旋轉(zhuǎn)頭。轉(zhuǎn)子準(zhǔn)確到位后,打開電源開關(guān),然后用手按下門開關(guān),然后按下操作鍵,旋轉(zhuǎn)后立即停止,觀察旋轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)向。如果逆時針旋轉(zhuǎn)正確,機(jī)器可以投入使用。



  2.操作程序


  (1)插入電源,待機(jī)指示燈亮;打開電源開關(guān),調(diào)速定時系統(tǒng)數(shù)字管顯示的閃爍數(shù)字為機(jī)器工作速度的出廠設(shè)置,溫控系統(tǒng)數(shù)字管顯示此時離心腔的溫度。


  (2)設(shè)置機(jī)器的工作參數(shù),如工作溫度、工作時間、工作速度等。


  (3)將預(yù)先平衡的樣品放在轉(zhuǎn)頭樣品架上,關(guān)閉機(jī)蓋。


  (4)按下控制面板的操作按鈕,離心機(jī)開始運行。其運行速度在預(yù)設(shè)的加速時間內(nèi)提高到預(yù)設(shè)值。


  (5)離心機(jī)在預(yù)設(shè)的運行時間內(nèi)(不含減速時間)開始減速,其速度在預(yù)設(shè)的減速時間內(nèi)降至零。


  (6)按控制面板上的停止鍵,數(shù)碼管顯示dedT,閃爍的速度值在幾秒鐘后顯示出來,這時機(jī)器已經(jīng)準(zhǔn)備好下一次工作了。


  3.注意事項


  (1)離心機(jī)應(yīng)始終處于水平位置,外部電源系統(tǒng)的電壓要匹配,并且要求有良好的接地線,機(jī)器不使用,要拔掉電源插頭。


  (2)開機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭安裝是否牢固,機(jī)腔內(nèi)是否有異物。


  (3)離心筒離心時,應(yīng)提前平衡樣品。


  (4)揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時,應(yīng)使用帶蓋的離心管,并確保液體不泄漏,以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。


  (5)不要隨意改變機(jī)器的工作參數(shù),除了工作溫度、運行速度和運行時間,以免影響機(jī)器的性能。速度設(shè)置不得超過最大速度,以確保機(jī)器的安全運行。


  (6)如果使用中出現(xiàn)0.00或其他數(shù)字,如果機(jī)器不運行,應(yīng)關(guān)閉機(jī)器并切斷電源。10秒后,重新啟動機(jī)器。設(shè)定的速度顯示后,按下操作按鈕,機(jī)器將照常工作。


  (7)在機(jī)器運行過程中或轉(zhuǎn)子未停穩(wěn)時,不得打開蓋門,以免發(fā)生事故。


  (8)每次操作完成后,應(yīng)做好使用記錄,并定期檢修機(jī)器的性能。


  二、電泳儀


  電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可或缺的手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)域電泳。自由界面電泳不需要支持,如等速電泳、密度梯度電泳和微電泳。目前,這種電泳很少使用。區(qū)域電泳需要各種類型的物質(zhì)作為支撐。常用的支撐是濾紙、醋酸纖維膜、非凝膠支撐、凝膠支撐和硅膠―G在分子生物學(xué)實驗中,最常用的薄層等是瓊脂糖凝膠電泳。電泳可以用來定性或定量地分析不同的物質(zhì),或分析某些混合物或提取和制備單個組件。DYY-以12型電腦三恒多用電泳儀(北京六一儀器廠)為例介紹其使用方法。


  1.使用方法


  (1)根據(jù)電源開關(guān),顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用DYY-12型計算機(jī)三恒多用電泳儀表…”等字后,同時系統(tǒng)初始化,蜂鳴4聲,設(shè)置常設(shè)置。屏幕轉(zhuǎn)換成參數(shù)設(shè)置狀態(tài),見圖1:


  U:0V U=100V|Mode:STD


  I:0mA I=50mA|


  P:0W P=50W|


  T:00:00 T=01:00|


  其中:左邊大寫U:I:P:T:電泳實際值;程序的常設(shè)值(預(yù)設(shè)值)在中間部分顯示。Mode(模式):STD(標(biāo)準(zhǔn));TIME(定時);VH(伏時);STEP(分步)


  (2)設(shè)置工作程序。用鍵盤輸入新的工作程序。例如,需要工作電壓U=1000V,電流I限制為200mA功率W限制在1000W時間T在3小時20分鐘內(nèi),輸出在到達(dá)時自動關(guān)閉。操作步驟如下:


  ①按“模式”鍵,標(biāo)準(zhǔn)工作模式(STD)轉(zhuǎn)為定時(TIME)


  模式。每按模式鍵,其工作方式按以下順序改變:STD?TIME?VH?STEP?STD。


 ?、谙仍O(shè)置電壓U,按“選擇”按鍵,先將其反向顯示,然后輸入數(shù)字鍵設(shè)置該參數(shù)的值。按1000的數(shù)字,然后設(shè)置電壓。


 ?、墼O(shè)置電流I,按“選擇”先使I反顯示,然后輸入數(shù)字200。


 ?、茉O(shè)置功率P,按“選擇”先使P反顯,然后輸入數(shù)字100。


 ?、菰O(shè)置時間T,按“選擇”鍵,先使T反顯,再輸入數(shù)字320。如果輸入錯誤,可以按“清除”再次輸入鍵。


 ?、薮_認(rèn)每個參數(shù)正確后,按“啟動”按鍵,啟動電泳儀輸出程序。顯示在顯示屏狀態(tài)欄中Start!并發(fā)出4個聲音,提醒操作員電泳計將輸出高電壓,注意安全。然后逐漸將輸出電壓添加到設(shè)定值。同時,在狀態(tài)欄中顯示“Run”并且有兩個高壓符號不斷閃爍,表示端口有電壓輸出。實際工作時間(精確到秒)顯示在狀態(tài)欄底部。


  ⑦每次啟動輸出時,儀器會自動存儲此時的設(shè)置值“MO”存儲單元。以后需要調(diào)用的時候可以按“讀取”鍵,再按“0”鍵,按“確定”按鍵即可取出上次設(shè)置的工作程序。


 ?、鄡x器顯示的電泳結(jié)束:“END”,并且連續(xù)蜂鳴提醒。此時按下任意一鍵即可止鳴。


  2.注意事項


  (1)U,I,P三個參數(shù)的有效輸入范圍是:U:5~3000V;I:4~400mA;P:4~400W.


  (2)一般情況下,當(dāng)No Load!首先要關(guān)機(jī)檢查電極線與電泳槽之間是否有接觸不良,可以用萬用表的歐姆檔逐段測量。


  (3)如果輸出端連接到多個電泳槽,則儀器顯示的電流值為每個電池槽的電流之和,此時應(yīng)選擇穩(wěn)壓輸出,以減少每個電池槽的相互影響。


  (4)注意保持儀器的清潔,不要遮擋儀器后方進(jìn)風(fēng)通道。嚴(yán)禁將電泳槽放在儀器頂部,避免緩沖液灑進(jìn)儀器內(nèi)部。


  (5)本儀器輸出電壓較高,使用中應(yīng)不避免接觸輸出回路及電泳槽內(nèi)部,以免發(fā)生危險。


  (6)長期不用儀器,應(yīng)放置在干燥通風(fēng)的清潔環(huán)境中保存。

 
 
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