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電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺的手段

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2022-10-31  瀏覽次數(shù):612
核心提示:  事實(shí)證明,在科學(xué)飛速發(fā)展的今天,無論我們從事什么領(lǐng)域的研究,除了有良好的理論基礎(chǔ)外,更重要的是依靠先進(jìn)的技術(shù)、優(yōu)秀的

  事實(shí)證明,在科學(xué)飛速發(fā)展的今天,無論我們從事什么領(lǐng)域的研究,除了有良好的理論基礎(chǔ)外,更重要的是依靠先進(jìn)的技術(shù)、優(yōu)秀的儀器設(shè)備和良好的研究環(huán)境。除了一般生物實(shí)驗(yàn)室的傳統(tǒng)儀器外,標(biāo)準(zhǔn)分子生物實(shí)驗(yàn)室還有一些特殊用途的儀器。這些儀器通常精確且昂貴。以下是這些儀器的使用方法和注意事項(xiàng)。


  一、冷凍離心機(jī)


  低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究的重要手段。基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其他生物樣品的分離和制備實(shí)驗(yàn)與低溫離心技術(shù)是不可分割的,因此低溫冷凍離心機(jī)已成為分子生物學(xué)研究的重要儀器。在中國,有許多制造商生產(chǎn)冷凍離心機(jī),實(shí)驗(yàn)室的高速冷凍離心機(jī)是GL-20G-Ⅱ類型(上海安亭),落地式。配角轉(zhuǎn)頭:6.×50ml,12×10ml和12×1.5ml。極限轉(zhuǎn)速20000rpm。


  1.安裝和調(diào)試


  離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)實(shí)的地面上,距離至少10分鐘cm在通風(fēng)良好的環(huán)境中,周圍空氣應(yīng)為中性,無導(dǎo)電粉塵、易燃?xì)怏w和腐蝕性氣體,環(huán)境溫度應(yīng)為0~30℃兩者之間,相對(duì)濕度小于80%。試運(yùn)行前,打開蓋門,用手移動(dòng)旋轉(zhuǎn)軸,輕巧靈活。只有在沒有異常現(xiàn)象的情況下才能使用旋轉(zhuǎn)頭。轉(zhuǎn)子準(zhǔn)確到位后,打開電源開關(guān),然后用手按下門開關(guān),然后按下操作鍵,旋轉(zhuǎn)后立即停止,觀察旋轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)向。如果逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)正確,機(jī)器可以投入使用。



  2.操作程序


  (1)插入電源,待機(jī)指示燈亮;打開電源開關(guān),調(diào)速定時(shí)系統(tǒng)數(shù)字管顯示的閃爍數(shù)字為機(jī)器工作速度的出廠設(shè)置,溫控系統(tǒng)數(shù)字管顯示此時(shí)離心腔的溫度。


  (2)設(shè)置機(jī)器的工作參數(shù),如工作溫度、工作時(shí)間、工作速度等。


  (3)將預(yù)先平衡的樣品放在轉(zhuǎn)頭樣品架上,關(guān)閉機(jī)蓋。


  (4)按下控制面板的操作按鈕,離心機(jī)開始運(yùn)行。其運(yùn)行速度在預(yù)設(shè)的加速時(shí)間內(nèi)提高到預(yù)設(shè)值。


  (5)離心機(jī)在預(yù)設(shè)的運(yùn)行時(shí)間內(nèi)(不含減速時(shí)間)開始減速,其速度在預(yù)設(shè)的減速時(shí)間內(nèi)降至零。


  (6)按控制面板上的停止鍵,數(shù)碼管顯示dedT,閃爍的速度值在幾秒鐘后顯示出來,這時(shí)機(jī)器已經(jīng)準(zhǔn)備好下一次工作了。


  3.注意事項(xiàng)


  (1)離心機(jī)應(yīng)始終處于水平位置,外部電源系統(tǒng)的電壓要匹配,并且要求有良好的接地線,機(jī)器不使用,要拔掉電源插頭。


  (2)開機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭安裝是否牢固,機(jī)腔內(nèi)是否有異物。


  (3)離心筒離心時(shí),應(yīng)提前平衡樣品。


  (4)揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí),應(yīng)使用帶蓋的離心管,并確保液體不泄漏,以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。


  (5)不要隨意改變機(jī)器的工作參數(shù),除了工作溫度、運(yùn)行速度和運(yùn)行時(shí)間,以免影響機(jī)器的性能。速度設(shè)置不得超過最大速度,以確保機(jī)器的安全運(yùn)行。


  (6)如果使用中出現(xiàn)0.00或其他數(shù)字,如果機(jī)器不運(yùn)行,應(yīng)關(guān)閉機(jī)器并切斷電源。10秒后,重新啟動(dòng)機(jī)器。設(shè)定的速度顯示后,按下操作按鈕,機(jī)器將照常工作。


  (7)在機(jī)器運(yùn)行過程中或轉(zhuǎn)子未停穩(wěn)時(shí),不得打開蓋門,以免發(fā)生事故。


  (8)每次操作完成后,應(yīng)做好使用記錄,并定期檢修機(jī)器的性能。


  二、電泳儀


  電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可或缺的手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)域電泳。自由界面電泳不需要支持,如等速電泳、密度梯度電泳和微電泳。目前,這種電泳很少使用。區(qū)域電泳需要各種類型的物質(zhì)作為支撐。常用的支撐是濾紙、醋酸纖維膜、非凝膠支撐、凝膠支撐和硅膠―G在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,最常用的薄層等是瓊脂糖凝膠電泳。電泳可以用來定性或定量地分析不同的物質(zhì),或分析某些混合物或提取和制備單個(gè)組件。DYY-以12型電腦三恒多用電泳儀(北京六一儀器廠)為例介紹其使用方法。


  1.使用方法


  (1)根據(jù)電源開關(guān),顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用DYY-12型計(jì)算機(jī)三恒多用電泳儀表…”等字后,同時(shí)系統(tǒng)初始化,蜂鳴4聲,設(shè)置常設(shè)置。屏幕轉(zhuǎn)換成參數(shù)設(shè)置狀態(tài),見圖1:


  U:0V U=100V|Mode:STD


  I:0mA I=50mA|


  P:0W P=50W|


  T:00:00 T=01:00|


  其中:左邊大寫U:I:P:T:電泳實(shí)際值;程序的常設(shè)值(預(yù)設(shè)值)在中間部分顯示。Mode(模式):STD(標(biāo)準(zhǔn));TIME(定時(shí));VH(伏時(shí));STEP(分步)


  (2)設(shè)置工作程序。用鍵盤輸入新的工作程序。例如,需要工作電壓U=1000V,電流I限制為200mA功率W限制在1000W時(shí)間T在3小時(shí)20分鐘內(nèi),輸出在到達(dá)時(shí)自動(dòng)關(guān)閉。操作步驟如下:


  ①按“模式”鍵,標(biāo)準(zhǔn)工作模式(STD)轉(zhuǎn)為定時(shí)(TIME)


  模式。每按模式鍵,其工作方式按以下順序改變:STD?TIME?VH?STEP?STD。


 ?、谙仍O(shè)置電壓U,按“選擇”按鍵,先將其反向顯示,然后輸入數(shù)字鍵設(shè)置該參數(shù)的值。按1000的數(shù)字,然后設(shè)置電壓。


 ?、墼O(shè)置電流I,按“選擇”先使I反顯示,然后輸入數(shù)字200。


 ?、茉O(shè)置功率P,按“選擇”先使P反顯,然后輸入數(shù)字100。


 ?、菰O(shè)置時(shí)間T,按“選擇”鍵,先使T反顯,再輸入數(shù)字320。如果輸入錯(cuò)誤,可以按“清除”再次輸入鍵。


  ⑥確認(rèn)每個(gè)參數(shù)正確后,按“啟動(dòng)”按鍵,啟動(dòng)電泳儀輸出程序。顯示在顯示屏狀態(tài)欄中Start!并發(fā)出4個(gè)聲音,提醒操作員電泳計(jì)將輸出高電壓,注意安全。然后逐漸將輸出電壓添加到設(shè)定值。同時(shí),在狀態(tài)欄中顯示“Run”并且有兩個(gè)高壓符號(hào)不斷閃爍,表示端口有電壓輸出。實(shí)際工作時(shí)間(精確到秒)顯示在狀態(tài)欄底部。


 ?、呙看螁?dòng)輸出時(shí),儀器會(huì)自動(dòng)存儲(chǔ)此時(shí)的設(shè)置值“MO”存儲(chǔ)單元。以后需要調(diào)用的時(shí)候可以按“讀取”鍵,再按“0”鍵,按“確定”按鍵即可取出上次設(shè)置的工作程序。


  ⑧儀器顯示的電泳結(jié)束:“END”,并且連續(xù)蜂鳴提醒。此時(shí)按下任意一鍵即可止鳴。


  2.注意事項(xiàng)


  (1)U,I,P三個(gè)參數(shù)的有效輸入范圍是:U:5~3000V;I:4~400mA;P:4~400W.


  (2)一般情況下,當(dāng)No Load!首先要關(guān)機(jī)檢查電極線與電泳槽之間是否有接觸不良,可以用萬用表的歐姆檔逐段測量。


  (3)如果輸出端連接到多個(gè)電泳槽,則儀器顯示的電流值為每個(gè)電池槽的電流之和,此時(shí)應(yīng)選擇穩(wěn)壓輸出,以減少每個(gè)電池槽的相互影響。


  (4)注意保持儀器的清潔,不要遮擋儀器后方進(jìn)風(fēng)通道。嚴(yán)禁將電泳槽放在儀器頂部,避免緩沖液灑進(jìn)儀器內(nèi)部。


  (5)本儀器輸出電壓較高,使用中應(yīng)不避免接觸輸出回路及電泳槽內(nèi)部,以免發(fā)生危險(xiǎn)。


  (6)長期不用儀器,應(yīng)放置在干燥通風(fēng)的清潔環(huán)境中保存。

 
 
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