免疫熒光熒光顯微鏡技術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用

  免疫熒光染色技術(shù)，它可能是目前應(yīng)用熒光顯微鏡最多的技術(shù)
。熒光團(tuán)標(biāo)記抗體可作為敏感而特異的探針，來(lái)標(biāo)記固定細(xì)胞和／
或通透性細(xì)胞內(nèi)的抗原，并能定位特定的蛋白質(zhì)。若用不同熒光團(tuán)
標(biāo)記兩個(gè)或更多抗體，并用它們來(lái)染細(xì)胞的話，則同時(shí)可見(jiàn)多種蛋
白質(zhì)的分布。本單元講述固定細(xì)胞與細(xì)胞染色的基本方法，以及發(fā)
現(xiàn)并解決潛在問(wèn)題的技巧。

  隨著選擇性標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的熒光染料的發(fā)現(xiàn)，熒光顯微鏡
又多了一個(gè)用途，即用來(lái)檢測(cè)活體內(nèi)特定細(xì)胞分子的空間分布。用
選擇性熒光探針標(biāo)記三種細(xì)胞器(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體與線粒體)
的方法，
  另一個(gè)較好的成像系統(tǒng)為共聚焦顯微鏡，它能收集標(biāo)本內(nèi)薄聚
焦面上的光線而清晰成像。
  共聚焦顯微鏡在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用；詳述如何實(shí)現(xiàn)共聚焦
光切片及如何重建標(biāo)本的三維圖像；也談到了不同類型的共聚焦顯
微鏡系統(tǒng)(包括激光掃描、快速掃描及雙光子)及其優(yōu)缺點(diǎn)，并提供
一些建議，便于該儀器的使用。
  采用免疫過(guò)氧化酶法定位細(xì)胞內(nèi)抗原。采用這種方法，在光學(xué)
顯微鏡及電子顯微下均能檢測(cè)蛋白質(zhì)的分布，進(jìn)而了解不同放大倍
數(shù)的細(xì)胞組織情況。本單元涉及一些關(guān)于確?？贵w進(jìn)入抗原所在的
細(xì)胞內(nèi)位置、保持抗原特性以及在固定與染色過(guò)程中維持較好的細(xì)
胞形態(tài)的技巧。另外，也談到了免疫過(guò)氧化物酶染色的優(yōu)缺點(diǎn)以及
確保其成功的操作技巧。

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