瓊脂糖凝膠魚類堅(jiān)定DNA技術(shù)分析圖像顯微鏡

用于魚種鑒定的DNA技術(shù)
對(duì)于不能用現(xiàn)有方法鑒定的魚種，DNA技術(shù)的應(yīng)用令人感興趣。與
蛋白質(zhì)一樣，DNA也會(huì)因加熱而降解，但目前已有技術(shù)從降解片段中分
離出具有種類特異性的片段，該方法最根本的是聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)。P
CR能使DNA上種類特異性序列成為目標(biāo)并被放大，目前大部分研究集中
在線粒體的DNA的細(xì)胞色素B基因上，因?yàn)樘貏e是對(duì)于魚，有很多序列可
用于比較，比如金槍魚，已經(jīng)進(jìn)行了廣泛的種系發(fā)生研究。DNA探針依
賴于探針序列與目標(biāo)DNA片段序列之間的特異性反應(yīng)。當(dāng)隨后的瓊脂膠
電泳分離時(shí)，就能鑒定和分離DNA產(chǎn)物，供其他技術(shù)進(jìn)一步分析。核苷
酸殘基序列可以用計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫(kù)測(cè)定與比較，或者用具有特異性的酶(
內(nèi)切酶)降解。降解的DNA可用瓊脂糖凝膠電泳分離，再在紫外光下檢測(cè)
可得到一組具有熒光的譜帶，只要所用的酶合適，這些譜帶與蛋白譜帶
一樣，具有種類特異性。DNA技術(shù)的一個(gè)很大的優(yōu)點(diǎn)是盡管由于罐藏加
工使DNA發(fā)生很大的降解，但仍有通過引物可辨認(rèn)的足夠材料。然而，
眾所周知，在商業(yè)操作中加熱程度有相當(dāng)大的差異，

而且通常會(huì)殺菌過度，因此評(píng)價(jià)鑒定罐裝魚品種的DNA技術(shù)必須考
慮這些系數(shù)。還有，也應(yīng)當(dāng)考慮魚在宰后及罐裝前的情況，因?yàn)樵诒?br>和冷凍貯藏時(shí)，已知DNA會(huì)發(fā)生一定程度的降解。

從罐裝金槍魚和原料金槍魚中分離得到的DNA的典型電泳圖。從所
有罐裝樣品中分離出的DNA都嚴(yán)重降解，僅有100對(duì)堿基殘基。通過選擇
對(duì)已知順序的細(xì)胞色素B線粒體基因，有特異性的引物，有可能在7種具
有重要商業(yè)意義的罐頭中分離到足量的PCR產(chǎn)物并得到它們的序列。通
過參考?jí)A基數(shù)據(jù)庫(kù)，可從它們的特定序列中鑒定出每一品種。然而，由
于罐裝前金槍魚的貯藏條件和罐藏?zé)崽幚項(xiàng)l件有很大的差異性，因此，
該方法在商品化罐藏制品方面還需要證實(shí)。

目前也已經(jīng)研究了限制性酶的應(yīng)用，并且根據(jù)電泳得到的分離圖譜
已經(jīng)確切證實(shí)了這種簡(jiǎn)單的方法可被用于罐裝金槍魚和鰹魚的常規(guī)物種
類鑒定

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