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上傳人： 上海銘博生物科技有限公司 |大?。?3.62KB|瀏覽：609次|下載：3次|上傳：2018-11-08
文檔簡介 細菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色譜法（HPLC）定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）主要用途細菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色譜法（HPLC）定量檢測試劑是一種旨在通過高氯酸酸性處理，堿性中和后，在高效液相色譜儀和紫外光度儀下（254nm波長）檢測分析，分離出ATP、ADP或AMP波峰，以定量測定樣品中腺嘌呤核苷酸含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細菌樣品中ATP、ADP、AMP的含量檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。技術(shù)背景腺嘌呤核苷酸（adeninenucleotides），簡稱腺苷，包括單磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷，是一種單體單位，為核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）的組成成分，并提供化學能量，在能量代謝通路中維護諸如肌肉、胞膜等組織細胞結(jié)構(gòu)的生化和生理功能，調(diào)節(jié)細胞糖酵解、三羧酸循環(huán)、電子傳遞系統(tǒng)、氧化磷酸化活動。腺嘌呤核苷酸在細胞中濃度低，且不穩(wěn)定，通常通過其類型不同、濃度差異、分布狀況，來評價細胞的代謝情況和能量狀態(tài)。單磷酸腺苷（Adenosinemonophosphate；AMP），又稱為5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸（5'-adenylicacid），是一種在（脫氧）核糖核酸中發(fā)現(xiàn)的核苷酸。它是一種磷酸及核苷腺苷的酯，并由磷酸基團、戊糖核酸糖及堿基腺嘌呤所組成。分子式為C10H14N5O7P，分子量347。AMP可以通過腺苷酸激酶（adenylatekinase）催化2分子ADP生成，或通過ATP以及ADP水解產(chǎn)生。AMP常以腺苷-3',5'-環(huán)化一磷酸（cAMP）形式存在于細胞中。AMP與ATP之比反映細胞ATP生成狀況以及脂肪酸氧化程度。二磷酸腺苷（adenosinediphosphate；ADP），參與ADP-ATP循環(huán)，提供熱能轉(zhuǎn)換和動態(tài)平衡。三磷酸腺苷（Adenosinetriphosphate；ATP）存在于所有代謝活躍的細胞內(nèi)，是細胞活力的標志。一旦細胞凋亡或壞死，ATP濃度急遽下降。通過高氯酸酸性處理，排除蛋白質(zhì)干擾，堿性中和后，在高效液相色譜儀和紫外光度儀下（254nm波長）檢測分析，分離出ATP、ADP、AMP波峰，以定量其含量。產(chǎn)品內(nèi)容酸性液（ReagentA）毫升中和液（ReagentB）毫升流相液A（ReagentC）毫升流相液B（ReagentD）毫升標準液（ReagentE）微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存標準液（ReagentE）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；酸性液（ReagentA）和中和液（ReagentB）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器4℃（微型）臺式離心機：用于樣品操作高效液相色譜儀（HPLC）：用于定量測定實驗步驟樣品準備準備好待測細菌樣品進行細菌計數(shù)：在分光光度儀上測定OD600或直接計數(shù)轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為10000g（或10000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液，保留沉淀顆粒加入XX微升預(yù)冷的酸性液（ReagentA）渦旋震蕩1分鐘轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管放進4℃微型臺式離心機再次離心10分鐘，速度為6000g小心移取上清液到新的1.5毫升離心管加入XX微升中和液（ReagentB），充分混勻置于冰槽里靜置30分鐘即刻移入上清液到新的1.5毫升離心管（注意：避免移取沉淀顆粒）放進－70℃冰箱里保存或置于冰槽里待測二、測定準備開啟儀器預(yù)熱15分鐘根據(jù)下表設(shè)置高效液相色譜儀（HPLC）參數(shù)參數(shù)推薦補充說明色譜柱長度：25cm直徑：4.6mmWaters儀器或Agilent儀器固定相ODS流動相流相液A（ReagentC）和流相液B（ReagentD）參見運行程序流速1.3毫升/分鐘注射容量50微升10微升至100微升檢測紫外波長254nm柱溫25℃出峰時間（retention）5.6分鐘（ATP）；6.5分鐘（ADP）；10分鐘(AMP)參考運行時間15分鐘參考運行程序運行時段程序時間開機后預(yù)運行XX流相液A（ReagentC）總10分鐘檢測運行時段XX流相液A（ReagentC）XX流相液B（ReagentD）0至9分鐘XX流相液A（ReagentC）至XX流相液A（ReagentC）XX流相液B（ReagentD）至XX流相液B（ReagentD）9至15分鐘關(guān)機前運行XX流相液A（ReagentC）XX流相液B（ReagentD）總10分鐘標準樣品配制準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管分別加入XX微升流相液A（ReagentC）到1至5號管移取XX微升標準液（ReagentE）到1號管，混勻小心移取XX微升1號管稀釋的標準液（ReagentE）到2號管，混勻小心移取XX微升2號管稀釋的標準液（ReagentE）到3號管，混勻小心移取XX微升3號管稀釋的標準液（ReagentE）到4號管，混勻?qū)?至5號管放進冰槽里備用，避免光照；標準管濃度見下表管號流相液A（ReagentC）標準液（ReagentE）標準ATP/ADP/AMP濃度1XX微升XX微升XX微摩爾/升2XX微升XX微升1號管XX微摩爾/升3XX微升XX微升2號管XX微摩爾/升4XX微升XX微升3號管XX微摩爾/升5XX微升00四、色譜分析將上述配制的標準液（ReagentE）和待測樣品放進冰槽里等待每次（每個樣品）注射50微升按照檢測運行程序每次（每個樣品）運行15分鐘獲得色譜波峰圖：波峰面積（peakarea）或峰值，保存記錄注意事項本產(chǎn)品為25次操作，包括標準液操作時，須戴手套系統(tǒng)操作過程中，標準液測定只需1次試劑具有揮發(fā)性，注意密閉瓶蓋或使用封口膜酸性液（ReagentA）和中和液（ReagentB）具有腐蝕性，注意操作安全建議使用流相液A（ReagentC）作為陰性對照或作為基準線色譜柱的異物殘留、氣泡產(chǎn)生、溫度未達均衡等將導致異常波峰、時間偏移等用戶可以使用已知濃度的標準液（ReagentE）作為內(nèi)參標準加入到樣品中，然后進行萃取，檢測回收率（recovery）腺嘌呤核苷酸的出峰時間（retention）以用戶操作時，使用的標準液（ReagentE）實際出峰為準用戶可以根據(jù)要求，計算實際濃度為：納摩爾/毫升、納摩爾/毫克蛋白等如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度腺嘌呤核苷酸HPLC的參考圖譜如下：
標簽： 相關(guān)產(chǎn)品
文檔簡介 細菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色譜法（HPLC）定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）主要用途細菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色譜法（HPLC）定量檢測試劑是一種旨在通過高氯酸酸性處理，堿性中和后，在高效液相色譜儀和紫外光度儀下（254nm波長）檢測分析，分離出ATP、ADP或AMP波峰，以定量測定樣品中腺嘌呤核苷酸含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細菌樣品中ATP、ADP、AMP的含量檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。技術(shù)背景腺嘌呤核苷酸（adeninenucleotides），簡稱腺苷，包括單磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷，是一種單體單位，為核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）的組成成分，并提供化學能量，在能量代謝通路中維護諸如肌肉、胞膜等組織細胞結(jié)構(gòu)的生化和生理功能，調(diào)節(jié)細胞糖酵解、三羧酸循環(huán)、電子傳遞系統(tǒng)、氧化磷酸化活動。腺嘌呤核苷酸在細胞中濃度低，且不穩(wěn)定，通常通過其類型不同、濃度差異、分布狀況，來評價細胞的代謝情況和能量狀態(tài)。單磷酸腺苷（Adenosinemonophosphate；AMP），又稱為5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸（5'-adenylicacid），是一種在（脫氧）核糖核酸中發(fā)現(xiàn)的核苷酸。它是一種磷酸及核苷腺苷的酯，并由磷酸基團、戊糖核酸糖及堿基腺嘌呤所組成。分子式為C10H14N5O7P，分子量347。AMP可以通過腺苷酸激酶（adenylatekinase）催化2分子ADP生成，或通過ATP以及ADP水解產(chǎn)生。AMP常以腺苷-3',5'-環(huán)化一磷酸（cAMP）形式存在于細胞中。AMP與ATP之比反映細胞ATP生成狀況以及脂肪酸氧化程度。二磷酸腺苷（adenosinediphosphate；ADP），參與ADP-ATP循環(huán)，提供熱能轉(zhuǎn)換和動態(tài)平衡。三磷酸腺苷（Adenosinetriphosphate；ATP）存在于所有代謝活躍的細胞內(nèi)，是細胞活力的標志。一旦細胞凋亡或壞死，ATP濃度急遽下降。通過高氯酸酸性處理，排除蛋白質(zhì)干擾，堿性中和后，在高效液相色譜儀和紫外光度儀下（254nm波長）檢測分析，分離出ATP、ADP、AMP波峰，以定量其含量。產(chǎn)品內(nèi)容酸性液（ReagentA）毫升中和液（ReagentB）毫升流相液A（ReagentC）毫升流相液B（ReagentD）毫升標準液（ReagentE）微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存標準液（ReagentE）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；酸性液（ReagentA）和中和液（ReagentB）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器4℃（微型）臺式離心機：用于樣品操作高效液相色譜儀（HPLC）：用于定量測定實驗步驟樣品準備準備好待測細菌樣品進行細菌計數(shù)：在分光光度儀上測定OD600或直接計數(shù)轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為10000g（或10000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液，保留沉淀顆粒加入XX微升預(yù)冷的酸性液（ReagentA）渦旋震蕩1分鐘轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管放進4℃微型臺式離心機再次離心10分鐘，速度為6000g小心移取上清液到新的1.5毫升離心管加入XX微升中和液（ReagentB），充分混勻置于冰槽里靜置30分鐘即刻移入上清液到新的1.5毫升離心管（注意：避免移取沉淀顆粒）放進－70℃冰箱里保存或置于冰槽里待測二、測定準備開啟儀器預(yù)熱15分鐘根據(jù)下表設(shè)置高效液相色譜儀（HPLC）參數(shù)參數(shù)推薦補充說明色譜柱長度：25cm直徑：4.6mmWaters儀器或Agilent儀器固定相ODS流動相流相液A（ReagentC）和流相液B（ReagentD）參見運行程序流速1.3毫升/分鐘注射容量50微升10微升至100微升檢測紫外波長254nm柱溫25℃出峰時間（retention）5.6分鐘（ATP）；6.5分鐘（ADP）；10分鐘(AMP)參考運行時間15分鐘參考運行程序運行時段程序時間開機后預(yù)運行XX流相液A（ReagentC）總10分鐘檢測運行時段XX流相液A（ReagentC）XX流相液B（ReagentD）0至9分鐘XX流相液A（ReagentC）至XX流相液A（ReagentC）XX流相液B（ReagentD）至XX流相液B（ReagentD）9至15分鐘關(guān)機前運行XX流相液A（ReagentC）XX流相液B（ReagentD）總10分鐘標準樣品配制準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管分別加入XX微升流相液A（ReagentC）到1至5號管移取XX微升標準液（ReagentE）到1號管，混勻小心移取XX微升1號管稀釋的標準液（ReagentE）到2號管，混勻小心移取XX微升2號管稀釋的標準液（ReagentE）到3號管，混勻小心移取XX微升3號管稀釋的標準液（ReagentE）到4號管，混勻?qū)?至5號管放進冰槽里備用，避免光照；標準管濃度見下表管號流相液A（ReagentC）標準液（ReagentE）標準ATP/ADP/AMP濃度1XX微升XX微升XX微摩爾/升2XX微升XX微升1號管XX微摩爾/升3XX微升XX微升2號管XX微摩爾/升4XX微升XX微升3號管XX微摩爾/升5XX微升00四、色譜分析將上述配制的標準液（ReagentE）和待測樣品放進冰槽里等待每次（每個樣品）注射50微升按照檢測運行程序每次（每個樣品）運行15分鐘獲得色譜波峰圖：波峰面積（peakarea）或峰值，保存記錄注意事項本產(chǎn)品為25次操作，包括標準液操作時，須戴手套系統(tǒng)操作過程中，標準液測定只需1次試劑具有揮發(fā)性，注意密閉瓶蓋或使用封口膜酸性液（ReagentA）和中和液（ReagentB）具有腐蝕性，注意操作安全建議使用流相液A（ReagentC）作為陰性對照或作為基準線色譜柱的異物殘留、氣泡產(chǎn)生、溫度未達均衡等將導致異常波峰、時間偏移等用戶可以使用已知濃度的標準液（ReagentE）作為內(nèi)參標準加入到樣品中，然后進行萃取，檢測回收率（recovery）腺嘌呤核苷酸的出峰時間（retention）以用戶操作時，使用的標準液（ReagentE）實際出峰為準用戶可以根據(jù)要求，計算實際濃度為：納摩爾/毫升、納摩爾/毫克蛋白等如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度腺嘌呤核苷酸HPLC的參考圖譜如下：
標簽： 相關(guān)產(chǎn)品
