DBH蛋白；多巴胺Β羥化酶(DBH)重組蛋白

英文名稱(chēng)：Recombinant Dopamine Beta Hydroxylase (DbH)

DBM; Dopamine Beta-Monooxygenase

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主：E.coli

規(guī)格：10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內(nèi)毒素水平： 1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)具體詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)

片段與標(biāo)簽：His335~Val571 (Accession # P09172) with N-terminal His Tag

物種來(lái)源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種）相同的名稱(chēng)，不同的物種。

DBH蛋白；多巴胺Β羥化酶(DBH)重組蛋白性狀：凍干粉

表達(dá)系統(tǒng)：  大腸桿菌

產(chǎn)品純度： 95%-98%（SDS-PAGE RP-HPLC）

保存條件：如果樣品在2-4周內(nèi)使用，可以在4°C低溫儲(chǔ)存。 

長(zhǎng)期儲(chǔ)存，建議添加載體蛋白（0.1％HSA或BSA），并儲(chǔ)存在-20~ -80°C。避免多次凍融。

A、DBH蛋白；多巴胺Β羥化酶(DBH)重組蛋白原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)為代表，具有遺傳背景清楚、成本低、表達(dá)量高和表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對(duì)簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)主要是蛋白質(zhì)翻譯后缺乏加工機(jī)制，如二硫鍵的形成、蛋白糖基化和正確折疊，得到具有生物活性的蛋白的幾率較小，查看原核蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)案例。

B、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)以甲醇酵母為代表，具有表達(dá)量高，可誘導(dǎo)，糖基化機(jī)制接近高等真核生物，分泌蛋白易純化，易實(shí)現(xiàn)高密發(fā)酵等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)為部分蛋白產(chǎn)物易降解，表達(dá)量不可控，查看酵母蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)案例。

C、桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)憑借高特異性高表達(dá)水平及翻譯后修飾功能，被用作一種表達(dá)大規(guī)模蛋白的強(qiáng)有力的工具系統(tǒng)，相對(duì)來(lái)說(shuō)，操作流程較多，成本偏高。查看桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)案例

D、哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)服務(wù)和昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)主要優(yōu)點(diǎn)是蛋白翻譯后加工機(jī)制最接近體內(nèi)的天然形式，最容易保留生物活性，缺點(diǎn)是表達(dá)量通常較低，穩(wěn)定細(xì)胞系建立技術(shù)難度大，生產(chǎn)成本高。查看哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)案例。

表達(dá)出來(lái)的蛋白比實(shí)際大小要小，這是為什么？

DBH蛋白；多巴胺Β羥化酶(DBH)重組蛋白主要原因有如下幾個(gè)方面

1. 蛋白本身被降解了，可以存在一些不利于該蛋白穩(wěn)定的蛋白酶。

2. 翻譯起始位點(diǎn)的問(wèn)題：如果一個(gè)類(lèi)似于核糖體結(jié)合位點(diǎn)(AAGGAGG)的序列加上適當(dāng)?shù)拈g隔序列出現(xiàn)在了ATG密碼子上游，降解就會(huì)有可能出現(xiàn)。解決的方法可以采用兩端都帶有融合標(biāo)簽的載體，例如pET系列部分載體在N-端和C-端都有His-Tag融合標(biāo)簽。這樣，全長(zhǎng)蛋白就可以通過(guò)提高咪唑濃度，在洗脫時(shí)將截短蛋白與全長(zhǎng)蛋白區(qū)分開(kāi)?；蛘咴诘鞍變啥瞬捎貌煌瑯?biāo)簽，進(jìn)而通過(guò)親和純化的方式得到全長(zhǎng)蛋白。

3. 影響蛋白穩(wěn)定性的另外一個(gè)因素是與N端Met相鄰的氨基酸，即N端原則，當(dāng)下列氨基酸出現(xiàn)在N端時(shí): Arg、 Lys、Phe、Leu、Trp和Tyr 蛋白的半衰期較短，蛋白會(huì)存在不穩(wěn)定降解的問(wèn)題，特別是Leu，當(dāng)它出現(xiàn)在第二個(gè)位置上時(shí)，蛋白極度不穩(wěn)定。在選擇克隆位點(diǎn)時(shí)， Nco I 和Nde I都是 是一個(gè)比較好的N端的克隆位點(diǎn)選擇，而使用NdeI的時(shí)候就要特別留意Leu的出現(xiàn)。