天美（中國）科學(xué)儀器有限公司

      對于腎臟疾病的研究，除了常規(guī)的腎臟疾病的診斷外，組織病理學(xué)診斷已經(jīng)廣泛應(yīng)用。被我們所熟知的是TEM（透射電鏡）在腎組織檢測中的廣泛應(yīng)用，由于樣本制備的復(fù)雜性以及受組織表面圖像信息的限制，掃描電鏡(SEM)在腎活檢檢測中的應(yīng)用仍未得到廣泛的探索。隨著臺式低真空掃描電子顯微鏡(LV-SEM)發(fā)展，利用其比光鏡的放大倍數(shù)和分辨率高得多的特點(diǎn)，研究者發(fā)現(xiàn)了一種新的觀察方法。LV-SEM可直接觀察普通的光鏡標(biāo)本無需進(jìn)一步制樣處理，同時可根據(jù)光鏡樣本的厚度，為在三維水平上進(jìn)行組織病理學(xué)檢測提供可能。應(yīng)用LV-SEM檢測方法，有望提高病理診斷的質(zhì)量。

      日立臺式掃描電鏡體積小，操作方便，不受暗室要求，具有很高的實(shí)用性。Tottori大學(xué)醫(yī)學(xué)院解剖學(xué)系的Sumire Inaga博士注意到其低真空特性，用背散射電子直接觀察沒有覆蓋蓋玻片的染色組織，得到了SEM圖像。

       結(jié)合常規(guī)的PASM-HE染色方法，同時Tottori大學(xué)的Sumire Inaga博士發(fā)明了用鉑進(jìn)行重金屬染色的方法—她稱之為“鉑藍(lán)”染色法—并證明了這種方法能夠有效地觀察細(xì)胞成分。鉑藍(lán)具有細(xì)胞組織特異性和有效增強(qiáng)背散射電子信號的特點(diǎn)，便于LV-SEM觀察石蠟包埋組織切片。在玻片上未染色的薄石蠟切片脫蠟后，用鉑藍(lán)溶液進(jìn)行染色，結(jié)果在LV-SEM觀察中清晰地顯示了光鏡標(biāo)本的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。這樣，鉑藍(lán)染色的圖像可以清晰地顯示細(xì)胞成分和其他成分，而鈍化的圖像可以清晰地顯示銀陽性的基底膜和其他成分。這些染色特征是互補(bǔ)的。通過連續(xù)切片PASM染色和platin-blue染色標(biāo)本的石蠟包埋組織，結(jié)合兩者的LV-SEM圖像，可以對同一位置組織病變的超細(xì)結(jié)構(gòu)圖像進(jìn)行嚴(yán)密的檢測（圖1）。

       薄基底膜病是一種遺傳性疾病，構(gòu)成基底膜的IV型膠原發(fā)生遺傳異常，導(dǎo)致腎小球基底膜變薄，臨床上以持續(xù)血尿?yàn)樘卣?。將LV-SEM應(yīng)用于經(jīng)遺傳檢查、免疫染色、TEM證實(shí)的薄基膜病變的標(biāo)本上，觀察到整個腎小球基底膜上的小裂縫和氣孔，表明它們與血尿有很強(qiáng)的相關(guān)性(圖2)。

IgA腎病是一種在日本和亞洲發(fā)病率較高的腎臟疾病。它的特點(diǎn)是IgA沉積，IgA是一種存在于腎小球中的免疫球蛋白，通常見于血尿的臨床病例。許多國家關(guān)于其病因和相關(guān)病理、治療方法

圖1PASE染色（左）與鉑藍(lán)染色（右）SEM對比圖

圖2薄基底膜病變的腎小球SEM圖

和預(yù)后的研究文獻(xiàn)很多，但涉及的機(jī)制的關(guān)鍵方面仍不清楚。許多病例的透射電鏡檢查報(bào)告表明，基底膜經(jīng)常變薄，少數(shù)證實(shí)基底膜有微小破裂，紅細(xì)胞從破裂處滲漏，但它們與血尿的共同聯(lián)系仍有待闡明。因此，我們開發(fā)了一種新的腎小球基底膜研究方法，對確診的IgA腎病病例的熒光染色標(biāo)本進(jìn)行PASM染色，通常需要熒光證據(jù)進(jìn)行診斷。這些PASM染色標(biāo)本由LV-SEM檢測。由此產(chǎn)生的LV-SEM三維圖像在IgA腎病(圖3)的腎小球基底膜上清楚地顯示出小的裂隙和孔的形成(圖3)，清楚的表明在脆弱的基底膜中形成大量的小破裂是血尿的原因。

圖3IgA腎病腎小球圖

LV-SEM可有效觀察腎活檢的光鏡標(biāo)本和任何其他組織的染色選擇。它的應(yīng)用很可能擴(kuò)展到常規(guī)透射電子顯微鏡無法進(jìn)行組織檢查，在常規(guī)光鏡檢查難以診斷的腫瘤以及許多需要超顯微信息的情況下。隨著LV-SEM的廣泛應(yīng)用，除了鉑藍(lán)染色和PASM銀染色外，新的染色技術(shù)也將出現(xiàn)，并將應(yīng)用于細(xì)胞病理學(xué)診斷、快速分析以滿足迫切需要這將是提高病理組織診斷準(zhǔn)確性的重要貢獻(xiàn)。

（來源：天美（中國）科學(xué)儀器有限公司）