安捷倫高效液相色譜儀操作說明

一、校槍及樣品處理

1.校槍

儀器：兩個小燒杯、分析天平、移液槍1000μL、100μL

步驟：打開分析天平預(yù)熱，一只燒杯放到稱量盤上調(diào)零，一只裝入純水。將移液槍1000μL、100μL調(diào)至950μL、50μL，分別吸取純水稱質(zhì)量，如偏大或偏小，調(diào)節(jié)移液槍直至準(zhǔn)確到0.001g。（如槍使用過久或氣密性不好，可以準(zhǔn)備一個小燒杯裝入純水，每次先輕輕沾濕槍口，甩掉水或在用衛(wèi)生紙吸取口上的水，再插上槍頭使用。）注意慢吸慢放，不要掛珠。

2.樣品處理：用1.5mL離心管取0.5mL發(fā)酵液，取出樣品后，首現(xiàn)在離心機(jī)上離心（13000rap/min3min）。然后將樣品稀釋20倍，取950μL純水、50μL發(fā)酵液于離心管中?；靹蚝笤陔x心機(jī)上離心（13000rap/min3min）。準(zhǔn)備自動進(jìn)樣瓶（瓶中放上內(nèi)襯管），取200μL待測液蓋緊蓋子。按順序放到自動進(jìn)樣盤中。

二、開機(jī)

1、儀器各組件

將在線脫氣器、泵：四元、進(jìn)樣器：自動進(jìn)樣器（六通閥）、柱溫箱、檢測器：示差折光檢測器開關(guān)打開。打開計算機(jī)，進(jìn)入WindowsXP畫面，并運(yùn)行CACServer程序，打開色譜儀各組件電源，待顯示已聯(lián)上各組件的信息及各模塊自檢完成后，雙擊Instrument1Online，圖標(biāo)打開工作站?；瘜W(xué)工作站自動與1200LC通訊。

流動相:

將流動相（一般不主張使用偏酸、偏堿的流動相）放入溶劑瓶中，打開沖洗閥，設(shè)流速為2ml/min，單擊確定，再依次單擊泵→控制，選中啟動，單擊確定，則系統(tǒng)開始沖洗，至管路無氣泡為止，切換管路反復(fù)操作至所需管路均無氣泡。在“控制”選項中選“關(guān)閉”，關(guān)閉泵，關(guān)閉沖洗閥。單擊泵下面瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實際體積和瓶體積。每次四元泵開始前，要打開沖洗閥閥門以5ml/min的流速沖洗10分鐘，使脫氣機(jī)與泵之間的流動相從沖洗閥流出，以免隔夜的流動相損傷色譜柱。

每次進(jìn)樣檢測前，要用流動相沖洗色譜柱30分鐘，達(dá)到柱溫前20min流速設(shè)為0.2ml/min，達(dá)柱溫后再改為0.6ml/min。待1—1.5h檢測器的基線穩(wěn)定方可進(jìn)行進(jìn)樣檢測；檢測結(jié)束后，色譜柱要先用水沖洗20分鐘，然后用甲醇或乙腈沖洗至少20分鐘，以延長色譜柱的使用壽命。絕對禁止偏酸、偏堿的流動相以及緩沖液在色譜柱中過夜。

三、編輯分析方法

新方法建立：

程序菜單顯示綠色，即可進(jìn)行參數(shù)設(shè)置及操作

泵參數(shù)設(shè)定：設(shè)定流速、比例、運(yùn)行時間、平衡時間、泵輔助設(shè)定（梯度）等。點擊確定進(jìn)入下一畫面

自動進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定：設(shè)定進(jìn)樣量（5μL）、抽取位置（調(diào)節(jié)針高度3.0mm）、進(jìn)樣方式等?！靶蛄小薄蛄袇?shù)→子目錄（日期：年月日時間）

“序列表”：插入/批量輸入向?qū)А白芳印薄ⅰ安迦搿薄皹悠肺恢谩?、“開始位置”、“增量”、“插入行數(shù)”

標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣：只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無洗針功能。

抽取位置：3.0mm

洗針進(jìn)樣：可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置此方式針從樣品瓶抽完樣品后會在洗瓶中洗針。柱溫箱參數(shù)設(shè)定：測定時75℃，反沖時80℃。（在”溫度”下面的方框內(nèi)輸入所需溫度，并選中它，點擊”更多 ”鍵，選中“與左側(cè)相同”使柱溫箱的溫度左右一致，點擊“確定”進(jìn)入下一界面。

檢測器參數(shù)設(shè)定－示差參比池

沖洗：10min（校零）。不需要每次都沖洗。溫度設(shè)置50℃（不要設(shè)很高，與檢測器溫度相當(dāng)即可）

選中點擊確定進(jìn)入下一畫面

方法保存：單擊方法另存為輸入一—方法名，如test單擊確認(rèn)

選擇已有方法：點擊【Method】，點擊【Loadmethod】選項，選取已存的各種操作方法。

四、樣品分析與采集數(shù)據(jù)將樣品放于樣品盤中相應(yīng)位置，所有的樣品均需澄清。

“序列”→“序列參數(shù)”：按照自動進(jìn)樣盤上的樣品瓶的順序編寫參數(shù)（樣品瓶位置、名稱、方法）。

待儀器顯示Ready，基線平穩(wěn)，從【Runcontrol】菜單中選擇【RunMethod】，開始進(jìn)樣分析?；螯c擊“開始”開始進(jìn)樣分析。

數(shù)據(jù)處理：單擊【View】菜單，單擊【Dataanalysis】選項，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。單擊【View】菜單，單擊【MethodandRuncontrol】選項，回到樣品分析界面。

數(shù)據(jù)分析方法編輯

從File菜單選擇Loadsignal選中您的數(shù)據(jù)文件名，單擊Ok

積分：從“積分”中選擇“積分”，如積分結(jié)果不理想，再從菜單中選擇“積分事件”選項選擇合適的斜率靈敏度、峰寬、最小峰面積、最小峰高

從積分菜單中選擇積分選項則數(shù)據(jù)被積分

如積分結(jié)果不理想則修改相應(yīng)的積分參數(shù)直到滿意為止

單擊左邊圖標(biāo)將積分參數(shù)存入方法

五、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

1.稱取葡萄糖、果糖、蔗糖（恒重）各1g準(zhǔn)確到0.0001g，稀釋到1000mL容量瓶中。

2.將標(biāo)準(zhǔn)溶液搖勻，用離心管取糖標(biāo)液，準(zhǔn)備自動進(jìn)樣瓶（瓶中放上內(nèi)襯管），取200μL待測液蓋緊蓋子。

3.設(shè)置：將樣品放于樣品盤中相應(yīng)位置，所有的樣品均需澄清。

“序列”→“序列參數(shù)”：按照自動進(jìn)樣盤上的樣品瓶的順序編寫參數(shù)（樣品瓶位置、名稱、方法、進(jìn)樣量:相應(yīng)成梯度的量）。用濃度和峰面積回歸，就得到了標(biāo)準(zhǔn)曲線

六、關(guān)機(jī)

沖洗系統(tǒng)：反相柱用10％的甲醇水沖洗系統(tǒng)30分鐘，再用100％甲醇沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后關(guān)泵，正相柱先用合適溶劑沖洗，后用柱保存液沖洗。退出工作站，關(guān)閉計算機(jī)。關(guān)閉10％異丙醇溶液控制閥。關(guān)閉儀器各組件，關(guān)掉電源開關(guān)。

安捷倫高效液相色譜儀

安捷倫高效液相色譜儀使用注意事項

1、色譜柱使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等;必須使用保護(hù)柱;色譜柱長時間不用時，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死保存。

2、流動相使用前必須過濾，不要使用多日存放的蒸餾水(易長菌)

3、溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護(hù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌。

4、檢測器的燈有使用壽命限制，一般在正式進(jìn)樣分析前30min左右開啟D燈或W燈，分析結(jié)束，立即關(guān)燈。5、儀器運(yùn)行時，泵頭必須用10%異丙醇水溶液虹吸沖洗，不能干涸。

6、注意各流動相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于最低限會自動停泵。

7、對于手動進(jìn)樣器當(dāng)使用緩沖溶液時要用水沖洗進(jìn)樣口同時搬動進(jìn)樣閥數(shù)次每次數(shù)毫升

8、若使用含鹽流動相，開機(jī)時必須先用10%甲醇水溶液沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相。

9、使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D(進(jìn)液口位于混合器下方)放置含鹽流動相，B、C(進(jìn)液口位于混合器上方)放置不含鹽流動相。