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大腸桿菌又名大腸埃希氏菌，是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入腸道，與人終身相伴，幾乎占糞便干重的1/3，是一種十分常見的細(xì)菌。在一定條件下可引起腸道外感染。某些血清型菌株的致病性強(qiáng)，引起腹瀉，統(tǒng)稱致病性大腸桿菌。大腸菌群是評(píng)價(jià)食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。
大腸桿菌菌群分布較廣，在溫血?jiǎng)游锛S便和自然界廣泛存在。調(diào)查研究表明，大腸菌群細(xì)菌多存在于溫血?jiǎng)游锛S便、人類經(jīng)?；顒?dòng)的場(chǎng)所以及有糞便污染的地方，人、畜糞便對(duì)外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多。
那么在實(shí)驗(yàn)室中，大腸桿菌如何培養(yǎng)呢？
1、稱藥品
按實(shí)際用量計(jì)算后，按配方稱取各種藥品放入大燒杯中。牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯;也可放在稱量紙上稱量，隨后放入熱水中，牛肉膏使與稱量紙分離，立即取出紙片。蛋白胨極易吸潮，故稱量時(shí)要迅速。
2、加熱溶解
在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱，并用玻棒攪拌，待藥品完全溶解后再補(bǔ)充水分至所需量。若配制固體培養(yǎng)基，則將稱好的瓊脂放入己溶解的藥品中，再加熱融化，此過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，最后補(bǔ)足所失的水分。
3、調(diào)pH
檢測(cè)培養(yǎng)基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙檢測(cè)，直至達(dá)到所需pH范圍。若偏堿，則用lmol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前。應(yīng)注意pH值不要調(diào)過頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。
4、過濾
液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過濾，以利培養(yǎng)的觀察。但是供一般使用的培養(yǎng)基，這步可省略。
5、分裝
按實(shí)驗(yàn)要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶?jī)?nèi)。分裝時(shí)可用漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上而造成污染。
復(fù)蘇大腸桿菌菌種時(shí)，用接種環(huán)或牙簽挑取少許凍結(jié)的菌種到平皿上，37℃培養(yǎng)8-12小時(shí)即可。甘油菌從冰箱取出使用時(shí)應(yīng)置于低溫或 0℃冰浴中，用完盡快放回，接種時(shí)挑取表面已融化部分即可，不可全溶，因反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂。
切記:接種過程中不得使保存瓶中的菌液融化。
1、常用的長(zhǎng)期保存法有:液體石蠟法、硅膠保存法、加入甘油或二甲基亞砜(DMSD)等保護(hù)劑。
2、甘油低溫保存法(-70℃—-196℃)的特點(diǎn)
甘油菌低溫保存的基本原理是:在-70℃或液氮中凍存，細(xì)菌內(nèi)的酶活性均己停止，即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài)，故可以長(zhǎng)期保存。在0℃—-70℃溫度范圍內(nèi)，水晶呈針狀，極易招致細(xì)菌的嚴(yán)重?fù)p傷。用電鏡觀察，可見細(xì)菌的核膜上有大量針尖樣小孔。因此，為了避免0℃—-70℃冰晶的形成和細(xì)菌膜兩側(cè)離子平衡的破壞，需要加保護(hù)劑。甘油可降低冰點(diǎn)，在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)菌內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)菌外。貯存在-70℃以下低溫中能減少冰晶形成，甘油對(duì)細(xì)菌無(wú)毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)菌。
