上一期文章，我們說到1996年，伊茨科維茨-艾爾多博士和湯姆森博士終于破除萬難，決定共同開展「人類胚胎干細(xì)胞分離合作案」，而這個(gè)偉大科學(xué)計(jì)劃背后，卻背負(fù)著違反美國聯(lián)邦法律 (禁止為任何科學(xué)研究破壞人類胚胎) 的巨大壓力，實(shí)驗(yàn)最后到底是如何完成的？就讓我們一起看下去~

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BI科學(xué)顧問與人類胚胎干細(xì)胞建系故事(上集)
(以下為重點(diǎn)節(jié)錄，原文全文請(qǐng)見文后鏈結(jié))

1997年，「由冷凍人類胚胎分離人類胚胎干細(xì)胞」的提案送到以色列海法的瑞本醫(yī)學(xué)中心 (Rambam Medical Center) 審議委員會(huì) (IRB)，提案在兩個(gè)月后通過，項(xiàng)目正式展開。

在取得冷凍人類胚胎所有者的同意后，36個(gè)冷凍胚胎于1998年初，以液態(tài)氮由以色列送到美國威斯康辛，伊茨科維茨-艾爾多博士的學(xué)生米哈爾阿米特 (Michal Amit) 全程護(hù)送，并留在湯姆森博士的實(shí)驗(yàn)室，詳細(xì)記錄所有分離胚胎干細(xì)胞的流程與結(jié)果。

1998年 1月22日，項(xiàng)目展開后不久，研究團(tuán)隊(duì)由美國實(shí)驗(yàn)室新鮮未凍存的測(cè)試胚胎樣品得到第一個(gè)ESC colony，并確立第一個(gè)人類胚胎干細(xì)胞系，H1。之后，以色列提供的冷凍胚胎投入實(shí)驗(yàn)，共有19個(gè)胚胎發(fā)育成為囊胚，其中有13個(gè)囊胚成功分離ICM (inner cell mass) 并培養(yǎng)在老鼠胚胎成纖維細(xì)胞上，最后得到4個(gè)人類胚胎干細(xì)胞系 (H7，H9，H13，和H14)。

 

人類胚胎干細(xì)胞系H9的分離過程

A. 分離的9號(hào)胚胎ICM培養(yǎng)在老鼠胚胎成纖維細(xì)胞上

B. H9 群落形成

C. H9 細(xì)胞形成 

D. 分化的H9細(xì)胞

(圖片來源：Thomson et al., 1998)
 

當(dāng)時(shí)，全世界很多實(shí)驗(yàn)室都參予了這場(chǎng)「人類胚胎干細(xì)胞建系競(jìng)賽」，誰第一個(gè)分離出人類胚胎干細(xì)胞，就可以名留青史；湯姆森博士的目標(biāo)是拿到世界第一，所以必須在1998年底前發(fā)表文章，這代表他必須在9個(gè)月內(nèi)完成一系列的文章及資料審查，眼看著自己即將抵達(dá)賽程終點(diǎn)，研究團(tuán)隊(duì)深深感受到被時(shí)間追著跑的壓力。

湯姆森博士終于在1998年8月將文章送到《科學(xué)》期刊 (Thomson et al., 1998)，由于題目極新穎所以很快就被接受、并確定發(fā)表時(shí)間；但在文章順利通過審查的喜悅下，卻埋藏著違反倫理道德的焦慮與不安，因?yàn)楫?dāng)時(shí)，破壞人類胚胎在很多國家是違法行為，隨著文章發(fā)表時(shí)間越來越近，研究團(tuán)隊(duì)對(duì)于未知輿論的壓力越來越大，深怕那些反對(duì)的破壞行為，會(huì)扼殺全世界的干細(xì)胞研究。為了避免一切可能的風(fēng)險(xiǎn)，兩位博士決定在文章發(fā)表前夕，將5個(gè)人類胚胎干細(xì)胞系 (H1，H7，H9，H13，和H14) 用干冰包裹，并以小行李箱放在頭等艙的行李架上運(yùn)往以色列。

以色列瑞本醫(yī)學(xué)中心在取得5個(gè)人類胚胎干細(xì)胞系后，與威斯康辛校友研究基金會(huì) (Wisconsin Alumni Research Foundation，WARF，負(fù)責(zé)威斯康辛大學(xué)與校外組織的合作研究項(xiàng)目) 簽訂材料移轉(zhuǎn)同意書，明確承諾不可用于臨床與商業(yè)用途，這也是后來人類胚胎干細(xì)胞研究遵循的基礎(chǔ)。自此，5個(gè)人類胚胎干細(xì)胞系在以色列瑞本醫(yī)學(xué)中心13樓伊茨科維茨-艾爾多博士實(shí)驗(yàn)室落地生根，這是第一個(gè)在美國境外培養(yǎng)人類胚胎干細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)室。

此后，伊茨科維茨-艾爾多博士實(shí)驗(yàn)室也陸續(xù)建立I3，I4，和I6人類胚胎干細(xì)胞系，這8個(gè)H和I系列人類胚胎干細(xì)胞系在美國總統(tǒng)布什任內(nèi)，登錄美國NIH體系，明確規(guī)定只能用于科學(xué)研究，且不得再產(chǎn)出新的人類胚胎干細(xì)胞系，一直到2009年美國總統(tǒng)奧巴馬才解除人類胚胎干細(xì)胞系的限制。

以色列瑞本醫(yī)學(xué)中心

(圖片來源：https://www.rambam.org.il 以色列瑞本醫(yī)學(xué)中心官網(wǎng))

留存人類胚胎干細(xì)胞系的壓力非常大，文章發(fā)表后，全球?qū)嶒?yàn)室希望分享細(xì)胞系的請(qǐng)求絡(luò)繹不絕，伊茨科維茨-艾爾多博士必須對(duì)各實(shí)驗(yàn)室的人類胚胎干細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)進(jìn)行審核，確保不會(huì)用于臨床與商業(yè)用途，而美國威斯康辛研究基金會(huì)也會(huì)不時(shí)探訪；最后，新的捐贈(zèng)者同意書依照美國NIH的要求修訂完成，加入將人類胚胎干細(xì)胞及衍生物使用于臨床與商業(yè)用途的相關(guān)條件，而伊茨科維茨-艾爾多博士也取得最初胚胎捐贈(zèng)者的新修訂授權(quán)同意書。

20年來，伊茨科維茨-艾爾多博士不僅建立了人類胚胎干細(xì)胞分化擬胚體實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，也提供人類胚胎干細(xì)胞系及相關(guān)的技術(shù)支持給全球研究學(xué)者，對(duì)于人類胚胎干細(xì)胞研究有極為卓越的貢獻(xiàn)，而伊茨科維茨-艾爾多博士與人類胚胎干細(xì)胞的旅程 還  在  繼  續(xù)  。

BI NutriStem  V9 XF Medium
人多能干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 

配合Vitronectin預(yù)包被培養(yǎng)器皿使用，支持無滋養(yǎng)層培養(yǎng)；
亦可將Vitronectin直接加入培養(yǎng)基中操作后續(xù)實(shí)驗(yàn)。