高效液相色譜法

　　色譜法具有許多明顯的優(yōu)勢(shì)，可以在各種條件下獲得一對(duì)手性化合物，可以滿足分離和測(cè)量的要求。它可以進(jìn)行簡單快速的定性和定量分析，也可以進(jìn)行制備規(guī)模的分離和微量測(cè)量。

　　色譜法已成為最有用的光學(xué)分割方法。這些方法包括高效的液相色譜法.氣相色譜法.薄層色譜法.超臨色譜法.毛細(xì)管電泳和逆流色譜-離心分配色譜法。其中，高效液相色譜法不會(huì)因高溫而改變?nèi)苜|(zhì)結(jié)構(gòu)，失去生物活性，柱的容量高，可以發(fā)展成實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)規(guī)模來分離映射系統(tǒng)的制備。

　　根據(jù)其原理，液相色譜法可分為以下三種類型

　　(1)手性衍生法

　　優(yōu)點(diǎn):分離條件比較簡單，只需要普通的HPLC色譜分離條件可以提高檢測(cè)(紫外或熒光)的靈敏度。

　　缺點(diǎn)：需要高純度的衍生試劑，每對(duì)映體的衍生速率不同。

　　(2)手性流動(dòng)相法

　　優(yōu)點(diǎn)：柱前不需要衍生，對(duì)色譜柱填料沒有特殊要求。

　　缺點(diǎn)：添加劑選擇不當(dāng)會(huì)干擾溶質(zhì)的檢測(cè)，可拆分化合物有限。

　　(3)手性固定相法

　　優(yōu)點(diǎn)：制備方便，適用于各種化合物的分割。

　　缺點(diǎn)：目前還沒有廣譜色譜固定相，需要根據(jù)樣品的結(jié)構(gòu)選擇合適的手性柱。

　　結(jié)論：手固定相法仍然是目前最具優(yōu)勢(shì)的光學(xué)異構(gòu)體分割方法。到目前為止，這種方法已經(jīng)分為幾十種類型.在過去的100年里，成千上萬種手性化合物的對(duì)映體超過了分離手性化合物對(duì)映異構(gòu)體的總和。

　　綜上所述，高效液相色譜儀和手性色譜柱廣泛應(yīng)用于手性分離領(lǐng)域。

　　這幾年我們用的是液相和色譜柱，大大小小的問題估計(jì)也遇到了很多，

　　所以在使用液相色譜的過程中，如何處理各種問題？

　　不用擔(dān)心，研創(chuàng)手性科技總結(jié)了一些解決方案，消除了你腦中的問號(hào)！

　　Part01：壓力

　　1.常見的儀器現(xiàn)象

　　壓力升高.降低或不穩(wěn)定

　　原因分析

　?、賰x表管道堵塞；

　　②泄漏.流動(dòng)相抽空.溶劑管濾芯堵塞；

　?、巯到y(tǒng)中有氣泡；

　　應(yīng)對(duì)方法

　　①對(duì)從泵到檢測(cè)器進(jìn)行系統(tǒng)檢查，確定堵塞部位；

　?、跈z查每個(gè)接口，檢查流動(dòng)相，超聲清洗或更換溶劑管濾芯；

　?、凼褂们俺暳鲃?dòng)相，排氣。

　　2.常見的色譜柱現(xiàn)象

　　柱頭塌陷，反壓上升，柱效下降

　　原因分析

　?、偃绻魉龠^大，會(huì)導(dǎo)致高柱壓或柱壓上升過快，尤其是使用高粘度溶劑(如IPA,EtOH）；

　?、诹鲃?dòng)相或樣品溶液過濾不徹底，固體顆粒堵塞管道或柱頭，會(huì)造成柱壓過高；

　　③在柱頭沉淀或強(qiáng)烈吸附樣品中的成分，會(huì)導(dǎo)致柱壓升高。

　　應(yīng)對(duì)方法

　　①如果柱前使用粘度高的溶劑導(dǎo)致柱壓升高，建議先用小流速更換以前的溶劑，待柱壓降穩(wěn)定后再進(jìn)樣檢測(cè)；

　?、谟捎谥鶋簡栴}導(dǎo)致柱頭塌陷，無法恢復(fù)柱的性能，出現(xiàn)異常后可嘗試反色譜柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；

　　③每個(gè)柱子都有特定的壓力范圍，請(qǐng)參考相應(yīng)的色譜柱說明書；

　?、茉诟鼡Q流動(dòng)相時(shí)，或?qū)⒅觿倓傔B接到儀器時(shí)，逐漸增加流速；

　?、輰?duì)流動(dòng)相和樣品溶液進(jìn)行徹底過濾；

　?、迾悠奉A(yù)處理；

　?、邇x器設(shè)置保護(hù)柱壓力。

　　Part02：基線

　　1.色譜柱常見現(xiàn)象

　　基線漂移.基線噪音大

　　2.原因分析

　?、僦鶞刈兓?；

　　②流動(dòng)相混合不均勻；

　?、哿魍ǔ匚廴净驓馀?；

　?、苌V柱平衡緩慢，特別是流動(dòng)相組成發(fā)生較大變化；

　?、萋┮?；

　?、奚V柱污染。

　　3.應(yīng)對(duì)方法

　?、倏刂茖?shí)驗(yàn)室溫度和柱溫箱溫度；

　　②使用HPLC溶劑、高純鹽及添加劑、流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣；使用前輕輕搖動(dòng)瓶子，使流動(dòng)相均勻；

　?、凼褂们扒逑戳魍ǔ?、流動(dòng)相脫氣；

　?、芟扔弥械葟?qiáng)度的溶劑沖洗柱子；

　?、葑⒁鈮毫?，排除漏液的地方；

　?、抻脧?qiáng)洗脫溶劑(在柱使用范圍內(nèi))定期沖洗柱子。

　　Part03：峰型

　　一.峰峰的常見現(xiàn)象

　　1.原因分析

　?、俜迩把厥怯芍鶞匾鸬?；

　?、跇悠啡軇┡c流動(dòng)不兼容；

　?、凵V柱前端濾網(wǎng)板堵塞；

　?、苤Ы档?；

　?、葜^塌陷。

　　2.應(yīng)對(duì)方法

　　①有時(shí)提高溫度可以消除前沿；

　?、谟昧鲃?dòng)相溶解增加流動(dòng)相極性或樣品；

　?、鄹鼡Q篩板。如果前延峰很快再次出現(xiàn)，注意檢查顆粒物(樣品、流動(dòng)相、泵、進(jìn)樣閥)的來源

　?、芙ㄗh使用保護(hù)柱沖洗色譜柱或更換色譜柱；

　?、莞鼡Q色譜柱。

　　二.峰峰型的常見現(xiàn)象

　　1.原因分析

　　①樣品超載；

　　②雜質(zhì)峰干擾；

　　③硅羥基作用；

　?、芟疵搹?qiáng)度不夠；

　?、葜怏w積或柱外體積過大；

　?、拗Ы档?；

　?、咧^塌陷

　　2.應(yīng)對(duì)方法

　　①降低樣品采樣量或稀釋樣品濃度；

　　②純化樣品或調(diào)整流量比例，使雜質(zhì)不干擾主峰；

　　③硅羥基作用；

　?、茉谥捎萌軇┓秶鷥?nèi)增加洗脫強(qiáng)度；

　?、轀p少連接點(diǎn)間隙，盡量選擇細(xì)管；

　　⑥建議使用保護(hù)柱沖洗色譜柱或更換色譜柱；

　　⑦更換色譜柱。

　　三.肩峰是峰型常見現(xiàn)象

　　1.原因分析

　?、偕V柱或保護(hù)柱入口污染；

　?、跇悠啡軇┡c流動(dòng)不兼容；

　?、鄹蓴_峰；

　?、苌V柱損壞。

　　2.應(yīng)對(duì)方法

　?、儆脧?qiáng)溶劑清洗色譜柱或更換色譜柱，必要時(shí)可反沖，更換保護(hù)柱；

　　②用流動(dòng)相稀釋樣品；

　　③可能是樣品中存在的物質(zhì)與目標(biāo)對(duì)象沒有分離，需要調(diào)整方法（調(diào)整流動(dòng)階段或更換色譜柱）來改變選擇性，可能是通過空白溶液引入系統(tǒng)的污染物；

　?、芨鼡Q色譜柱。

　　Part04：誤進(jìn)溶劑

　　1.常見現(xiàn)象

　　柱壓劇增，分離突然變差

　　2.原因分析

　?、偻糠笮彤a(chǎn)品（Y1-Y5)如果導(dǎo)入錯(cuò)誤的溶劑(如二氯甲烷).四氫呋喃.乙酸乙酯.甲苯等)，立即破壞柱子；

　?、谡嗍中灾统Ｓ昧鲃?dòng)相的保存溶液含有大比例的正己烷，而正己烷和甲醇.乙腈.水的互溶性很差，如果沒有適當(dāng)?shù)娜軇┲脫Q，柱壓也可能被破壞，因?yàn)橹又性械娜軇┎蝗苡谌軇?/p>

　　3.應(yīng)對(duì)方法

　?、偃軇┮坏┱`用，恢復(fù)柱子性能的可能性很低；

　?、诹⒓赐Ｖ贡?，取下立柱，先用合適的溶劑(如乙醇)更換儀器前的溶劑，然后用立柱低速?zèng)_洗(至少20倍立柱體積)更換立柱中的誤溶劑。

　　Part05：殘留效應(yīng)

　　1.常見現(xiàn)象

　　方法再現(xiàn)性差

　　2.原因分析

　?、僭谄胀鲃?dòng)相中，殘留物可長期穩(wěn)定保留，“老化”柱子；

　?、趯?shí)驗(yàn)后柱清洗不好。

　　3.應(yīng)對(duì)方法

　?、俪霈F(xiàn)問題后可以嘗試沖洗后再使用；

　?、谟谩芭f柱”在新柱上必須確認(rèn)開發(fā)方法。