高效液相色譜法

　　色譜法具有許多明顯的優(yōu)勢，可以在各種條件下獲得一對手性化合物，可以滿足分離和測量的要求。它可以進行簡單快速的定性和定量分析，也可以進行制備規(guī)模的分離和微量測量。

　　色譜法已成為最有用的光學分割方法。這些方法包括高效的液相色譜法.氣相色譜法.薄層色譜法.超臨色譜法.毛細管電泳和逆流色譜-離心分配色譜法。其中，高效液相色譜法不會因高溫而改變?nèi)苜|(zhì)結(jié)構(gòu)，失去生物活性，柱的容量高，可以發(fā)展成實驗室和工業(yè)規(guī)模來分離映射系統(tǒng)的制備。

　　根據(jù)其原理，液相色譜法可分為以下三種類型

　　(1)手性衍生法

　　優(yōu)點:分離條件比較簡單，只需要普通的HPLC色譜分離條件可以提高檢測(紫外或熒光)的靈敏度。

　　缺點：需要高純度的衍生試劑，每對映體的衍生速率不同。

　　(2)手性流動相法

　　優(yōu)點：柱前不需要衍生，對色譜柱填料沒有特殊要求。

　　缺點：添加劑選擇不當會干擾溶質(zhì)的檢測，可拆分化合物有限。

　　(3)手性固定相法

　　優(yōu)點：制備方便，適用于各種化合物的分割。

　　缺點：目前還沒有廣譜色譜固定相，需要根據(jù)樣品的結(jié)構(gòu)選擇合適的手性柱。

　　結(jié)論：手固定相法仍然是目前最具優(yōu)勢的光學異構(gòu)體分割方法。到目前為止，這種方法已經(jīng)分為幾十種類型.在過去的100年里，成千上萬種手性化合物的對映體超過了分離手性化合物對映異構(gòu)體的總和。

　　綜上所述，高效液相色譜儀和手性色譜柱廣泛應(yīng)用于手性分離領(lǐng)域。

　　這幾年我們用的是液相和色譜柱，大大小小的問題估計也遇到了很多，

　　所以在使用液相色譜的過程中，如何處理各種問題？

　　不用擔心，研創(chuàng)手性科技總結(jié)了一些解決方案，消除了你腦中的問號！

　　壓力

　　1.常見的儀器現(xiàn)象

　　壓力升高.降低或不穩(wěn)定

　　2.原因分析

　?、賰x表管道堵塞；

　　②泄漏.流動相抽空.溶劑管濾芯堵塞；

　?、巯到y(tǒng)中有氣泡；

　　3.應(yīng)對方法

　　①對從泵到檢測器進行系統(tǒng)檢查，確定堵塞部位；

　?、跈z查每個接口，檢查流動相，超聲清洗或更換溶劑管濾芯；

　?、凼褂们俺暳鲃酉?，排氣。

　　1.色譜柱常見現(xiàn)象

　　柱頭塌陷，反壓上升，柱效下降

　　2.原因分析

　?、偃绻魉龠^大，會導致高柱壓或柱壓上升過快，尤其是使用高粘度溶劑(如IPA,EtOH）；

　?、诹鲃酉嗷驑悠啡芤哼^濾不徹底，固體顆粒堵塞管道或柱頭，會造成柱壓過高；

　　③在柱頭沉淀或強烈吸附樣品中的成分，會導致柱壓升高。

　　3.應(yīng)對方法

　?、偃绻笆褂谜扯雀叩娜軇е轮鶋荷?，建議先用小流速更換以前的溶劑，待柱壓降穩(wěn)定后再進樣檢測；

　?、谟捎谥鶋簡栴}導致柱頭塌陷，無法恢復柱的性能，出現(xiàn)異常后可嘗試反色譜柱進行實驗；

　?、勖總€柱子都有特定的壓力范圍，請參考相應(yīng)的色譜柱說明書；

　?、茉诟鼡Q流動相時，或?qū)⒅觿倓傔B接到儀器時，逐漸增加流速；

　?、輰α鲃酉嗪蜆悠啡芤哼M行徹底過濾；

　?、迾悠奉A(yù)處理；

　　⑦儀器設(shè)置保護柱壓力。

　　基線

　　1.色譜柱常見現(xiàn)象

　　基線漂移.基線噪音大

　　2.原因分析

　?、僦鶞刈兓?；

　?、诹鲃酉嗷旌喜痪鶆?；

　?、哿魍ǔ匚廴净驓馀?；

　　④色譜柱平衡緩慢，特別是流動相組成發(fā)生較大變化；

　?、萋┮?；

　?、奚V柱污染。

　　3.應(yīng)對方法

　?、倏刂茖嶒炇覝囟群椭鶞叵錅囟龋?/p>

　?、谑褂肏PLC溶劑、高純鹽及添加劑、流動相在使用前進行脫氣；使用前輕輕搖動瓶子，使流動相均勻；

　?、凼褂们扒逑戳魍ǔ亍⒘鲃酉嗝摎?；

　　④先用中等強度的溶劑沖洗柱子；

　?、葑⒁鈮毫?，排除漏液的地方；

　?、抻脧娤疵撊軇?在柱使用范圍內(nèi))定期沖洗柱子。

　　峰型

　　一.峰峰的常見現(xiàn)象

　　1.原因分析

　?、俜迩把厥怯芍鶞匾鸬?；

　?、跇悠啡軇┡c流動不兼容；

　?、凵V柱前端濾網(wǎng)板堵塞；

　?、苤Ы档?；

　?、葜^塌陷。

　　2.應(yīng)對方法

　?、儆袝r提高溫度可以消除前沿；

　　②用流動相溶解增加流動相極性或樣品；

　?、鄹鼡Q篩板。如果前延峰很快再次出現(xiàn)，注意檢查顆粒物(樣品、流動相、泵、進樣閥)的來源

　?、芙ㄗh使用保護柱沖洗色譜柱或更換色譜柱；

　　⑤更換色譜柱。

　　二.峰峰型的常見現(xiàn)象

　　1.原因分析

　　①樣品超載；

　　②雜質(zhì)峰干擾；

　　③硅羥基作用；

　?、芟疵搹姸炔粔?；

　?、葜怏w積或柱外體積過大；

　　⑥柱效降低；

　　⑦柱頭塌陷

　　2.應(yīng)對方法

　?、俳档蜆悠凡蓸恿炕蛳♂寴悠窛舛龋?/p>

　?、诩兓瘶悠坊蛘{(diào)整流量比例，使雜質(zhì)不干擾主峰；

　?、酃枇u基作用；

　?、茉谥捎萌軇┓秶鷥?nèi)增加洗脫強度；

　?、轀p少連接點間隙，盡量選擇細管；

　?、藿ㄗh使用保護柱沖洗色譜柱或更換色譜柱；

　?、吒鼡Q色譜柱。

　　三.肩峰是峰型常見現(xiàn)象

　　1.原因分析

　?、偕V柱或保護柱入口污染；

　　②樣品溶劑與流動不兼容；

　?、鄹蓴_峰；

　?、苌V柱損壞。

　　2.應(yīng)對方法

　　①用強溶劑清洗色譜柱或更換色譜柱，必要時可反沖，更換保護柱；

　　②用流動相稀釋樣品；

　?、劭赡苁菢悠分写嬖诘奈镔|(zhì)與目標對象沒有分離，需要調(diào)整方法（調(diào)整流動階段或更換色譜柱）來改變選擇性，可能是通過空白溶液引入系統(tǒng)的污染物；

　　④更換色譜柱。

　　誤進溶劑

　　1.常見現(xiàn)象

　　柱壓劇增，分離突然變差

　　2.原因分析

　　①涂敷型產(chǎn)品（Y1-Y5)如果導入錯誤的溶劑(如二氯甲烷).四氫呋喃.乙酸乙酯.甲苯等)，立即破壞柱子；

　?、谡嗍中灾统Ｓ昧鲃酉嗟谋４嫒芤汉写蟊壤恼和?，而正己烷和甲醇.乙腈.水的互溶性很差，如果沒有適當?shù)娜軇┲脫Q，柱壓也可能被破壞，因為柱子中原有的溶劑不溶于溶劑。

　　3.應(yīng)對方法

　?、偃軇┮坏┱`用，恢復柱子性能的可能性很低；

　?、诹⒓赐Ｖ贡?，取下立柱，先用合適的溶劑(如乙醇)更換儀器前的溶劑，然后用立柱低速沖洗(至少20倍立柱體積)更換立柱中的誤溶劑。

　　殘留效應(yīng)

　　1.常見現(xiàn)象

　　方法再現(xiàn)性差

　　2.原因分析

　?、僭谄胀鲃酉嘀校瑲埩粑锟砷L期穩(wěn)定保留，“老化”柱子；

　　②實驗后柱清洗不好。

　　3.應(yīng)對方法

　　①出現(xiàn)問題后可以嘗試沖洗后再使用；

　?、谟谩芭f柱”在新柱上必須確認開發(fā)方法。

　　最后，提供研究和創(chuàng)造篩選柱流程圖和正/反相手動柱包裝