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北京巴玖為您解說測序試驗的準(zhǔn)備好崗位及流程

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-04-28  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):48
核心提示:步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備;②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度

步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備;②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合;③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在酶的作用下,以P為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復(fù)制鏈。 重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的 半保留復(fù)制鏈 ,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
實驗試劑與器材:
模板DNA、2.5mmol/L q DNA聚合酶(5U/SSR引物10 buffer、15mmol/L Mg2+、ddH2OPCR儀、移液槍、PCR板
實驗步驟:
一、實驗器具與材料: 1、移液槍:1ml、200 l、20 l、10 l、2 l 2、吸頭:1ml、200 l、20 l 3、勻漿管:5ml 4、吸頭臺:放置1ml吸頭的一個,放置20 l吸頭的一個 5、EP管:1.5ml、0.2ml、100 l 6、試劑瓶:2個60ml的棕色試劑瓶(廣口,帶蓋) 1個125ml的白色試劑瓶(放無水乙醇) 7、量筒:50ml、250ml、500ml 8、容量瓶:250ml、500ml、1000ml 9、試管架:5ml、1.5ml、20 l 10、鹽水瓶:250ml、500ml各2個備用,一個裝無水乙醇,另一個裝DEPC水 11、鋁制飯盒:4個 12、塑料小飯盒:1個 13、大瓷缸:2個 14、錫泊紙:一卷 15、卷紙:2卷 16、三角燒瓶:帶蓋,稍大
實驗器具的處理與準(zhǔn)備:
1、塑料制品:(包括槍頭、EP管、勻漿管等) 先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中,將塑料制品逐個浸泡其中,其中小槍頭需要吸管打入DEPC水,過夜,然后高壓,再烤干備用,實驗前將槍頭等放入吸頭臺,再高壓一次(EP管)2、玻璃制品:泡酸過夜,沖洗干凈,蒙錫紙烤干備用(DEPC水泡)(洗凈后先泡1 DEPC過夜,再烤干)3、勻漿器:(包括剪刀、鑷子)先洗凈后,再高壓(不需要泡DEPC)
試劑配制:1、DEPC水:吸出1ml放在1000ml雙蒸水中配成1 DEPC水,放在1000ml容量瓶中靜置4小時備用。2、75%乙醇:用無水乙醇 DEPC水配,然后放-20℃保存(其中DEPC水需先高壓)3、異丙醇:放入棕色瓶中4:放入棕色瓶中5、瓊脂糖

 
關(guān)鍵詞: 模板 DNA DEPC 引物 一個
 
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