摘要

由美國藥物濫用與精神健康服務管理局（SAMHSA）頒布，于2010 年10 月生效的新準則，允許在政府認證的藥物檢測實驗室采用LC/MS/MS 法確認初步藥物測試結果。由于LC/MS/MS 法不需要衍生步驟，因此它遠比以前應用的GC/MS 法要簡便的多。我們提出了一種滿足最新SAMHSA 準則要求的5 種苯丙胺類藥物的分析方法，并對其線性、檢測限（LOD）、準確度和精密度進行論證，還對該方法的基質效應、萃取回收率和總處理效率進行了考察。這是涵蓋所有SAMHSA 監(jiān)控藥物類別的一系列六種簡便檢測方法之一，該方法主要使用安捷倫產品進行分析，包括Agilent Bond Elut Plexa PCX 混合模式聚合物SPE 吸附劑，Agilent Poroshell 120 EC-C18，2.7μm 表面多孔LC 色譜柱，Agilent 1200 Infinity LC 系統(tǒng)以及應用安捷倫噴射流技術（AJST）增強電噴霧離子源的Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 系統(tǒng)。

前言

苯丙胺類藥物屬于擬交感神經胺類化合物，是很強的神經興奮劑，其功效和作用類似于內源性神經遞質，如腎上腺素、去甲腎上腺素和多巴胺。苯丙胺類成分是在草麻黃葉子中發(fā)現(xiàn)的（例如麻黃堿），并且于19 世紀末第一次被合成出來。它們化學結構的特征是具有一個苯乙胺骨架，α碳上連著一個甲基，還有其它的一些取代基團。很大一部分苯丙胺類化合物以原型藥物形式從尿液中排出。通過去甲基化作用，較復雜的苯丙胺類衍生物被代謝為較簡單的結構，例如甲基苯丙胺代謝為苯丙胺，MDMA 代謝為MDA。除了苯丙胺類藥物，還有許多其它種類的藥物會在人體內代謝成甲基苯丙胺和苯丙胺類物質，這就是所謂的苯丙胺類生成藥物或苯丙胺前體化合物，例如安非他尼、氯芐苯丙胺、芬乙茶堿和丙炔苯丙胺等。2011 版的SAMHSA 準則要求對5 種苯丙胺類藥物進行篩選并確認，分別是苯丙胺、甲基苯丙胺、MDA、MDMA 和MDEA。所用分析方法應具備使這些藥物與其結構類似物相區(qū)分的能力，以確保避免潛在的干擾，這些干擾物包括麻黃堿、偽麻黃堿、芬特明和苯丙醇胺（即PPA 或去甲麻黃堿）等。

在檢測苯丙胺類藥物的傳統(tǒng)GC/MS 法中，通常用高碘酸預處理來氧化羥基苯乙胺類成分如麻黃堿和偽麻黃堿，以排除此類化合物的干擾。我們取消了這一步驟，而是依據(jù)最新SAMHSA 準則中所要求的對所有目標分析物實現(xiàn)了可靠的色譜分離。新的SAMHSA 準則規(guī)定苯丙胺類藥物的最高限量濃度為 250 ng/mL，檢測限為限量濃度的10%，即25 ng/mL。由于預計在一些尿樣中可能出現(xiàn)高濃度苯丙胺類藥物（如同阿片類藥物），我們選擇使用更高容量的3 mm id Agilent Poroshell 120 色譜柱 代替所有以前安捷倫SAMHSA 方法中的2 mm id 色譜柱。與亞 2 μm 的UHPLC 色譜柱相比，填充了2.7 μm 表面多孔顆粒的 Poroshell 120 色譜柱具有與其類似的柱效，但其背壓卻減少了 40%左右。因此，它甚至允許用戶在耐壓400 bar 的常規(guī)液相色譜系統(tǒng)上通過使用更高的流速來提高分辨率，同時縮短分析時間和再平衡時間。

由于Agilent Bond Elut Plexa 的獨特性質，本文所描述的提取方法獲得了苯丙胺類藥物極高的回收率，且重復性好。不像其它聚合物吸附劑，Plexa 顆粒具有無氨基的羥基化表面，避免了蛋白質的結合。從而獲得了最小的離子抑制作用和最高的檢測靈敏度。高流速和良好重復性的實現(xiàn)，主要得益于色譜柱填料的窄粒徑分布，并且不含易引起堵塞的細顆粒。

在較小的樣品進樣體積（2 μL）和無預富集的條件下，該方法獲得了極好的信噪比（樣品濃度25ng/mL 時 400:1，該濃度只有 SAMHSA 規(guī)定限量濃度的10%），這得益于應用了AJST 技術的 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 系統(tǒng)電噴霧離子源增強了檢測靈敏度。

安捷倫以前的分析方法（由Moorman 和Hughes 開發(fā)，2010）采用的是Agilent 6410 Triple Quadrupole LC/MS 系統(tǒng)和其它的 SPE/LC 產品和操作步驟。

結論

本文所描述的固相萃取樣品制備與LC/MS/MS 檢測相結合的分析方法完全遵循SAMHSA 要求，為認證實驗室的藥物測試或其它有類似要求的分析環(huán)境的測試提供高精密度、準確度和重現(xiàn)性的有法律效力的數(shù)據(jù)結果。其硬件配置與2011 版SAMHSA 方法中的相同均來自安捷倫。這些方法特別為安捷倫1100 和安捷倫 1200 LC 系列的所有用戶開發(fā)，這些LC 系統(tǒng)的背壓均不超過 400 bar。采用其它型號的安捷倫三重四極桿LC/MS 系統(tǒng)應用本方法時，離子源參數(shù)可以很容易地修改。安捷倫科技可提供電子版本的LC/MS/MS 數(shù)據(jù)采集和定量分析方法。