HGF蛋白;肝細胞生長因子(HGF)重組蛋白
英文名稱:Recombinant Hepatocyte Growth Factor (HGF)
HGF; F-TCF; HGFB; HPTA; SF; Scatter Factor; Hepapoietin A; Fibroblast-Derived Tumor Cytotoxic Factor; Lung Fibroblast-Derived Mitogen
來源:原核表達
宿主:E.coli
規(guī)格:10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
內(nèi)毒素水平: 1.0EU/μg(LAL法測定)具體詳見說明書
片段與標簽:Val495~Ser730 with N-terminal His Tag
物種來源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種)相同的名稱,不同的物種。
HGF蛋白;肝細胞生長因子(HGF)重組蛋白性狀:凍干粉
表達系統(tǒng): 大腸桿菌
產(chǎn)品純度: 95%-98%(SDS-PAGE & RP-HPLC)
保存條件:如果樣品在2-4周內(nèi)使用,可以在4°C低溫儲存。
長期儲存,建議添加載體蛋白(0.1%HSA或BSA),并儲存在-20~ -80°C。避免多次凍融。
HGF蛋白;肝細胞生長因子(HGF)重組蛋白的分泌表達優(yōu)點:
1、一些可被細胞內(nèi)蛋白酶所降解的蛋白質(zhì)分泌到周質(zhì)或培養(yǎng)基中可增加其穩(wěn)定性;
2、有些在細胞內(nèi)表達時無活性的蛋白分泌表達時能夠按適當?shù)姆绞竭M行準確折疊,增加到蛋白的活性;
3、 由于蛋白質(zhì)信號肽和編碼序列間被切割,所以分泌蛋白產(chǎn)物不含氨基酸起始密碼子 ATG 所編碼的甲硫氨酸,而甲硫氨酸會影響許多蛋白的活性。
HGF蛋白;肝細胞生長因子(HGF)重組蛋白和天然蛋白有什么區(qū)別:
蛋白質(zhì)重組,先要全部水解為氨基酸,蛋白質(zhì)的種類多就是因為它的數(shù)量大,結構復雜,空間結構千變?nèi)f化。而基本的氨基酸只有20中,所以它重組以后就可能變成完全不同的東西,控制和以前完全無關的代謝過程。
基因重組只是控制同一性狀表達不同而已,但是它不會改變性狀的基本情況。如:控制眼睛顏色的基因,親本的基因重組之后可能親本為黑色,子代便為藍色。但不會控制眼睛顏色的基因在重組之后就變成控制耳朵的基因。
HGF蛋白;肝細胞生長因子(HGF)重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在 -80℃ 條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應用中經(jīng)常遇到的問題。
(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech 大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復溶劑即可,復溶凍干蛋白 100μg,用 86μl 的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可完全溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加 8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結構改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,甘露醇也是一種普遍應用的凍干保護劑和填充劑。
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