PCNA蛋白；抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)重組蛋白

英文名稱：Recombinant Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA)

Cyclin

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主：E.coli

規(guī)格：10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內(nèi)毒素水平： 1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)具體詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)

片段與標(biāo)簽：Leu6~Ser261 with N-terminal His and GST Tag

物種來(lái)源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種）相同的名稱，不同的物種。

PCNA蛋白；抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)重組蛋白性狀：凍干粉

表達(dá)系統(tǒng)：  大腸桿菌

產(chǎn)品純度： 95%-98%（SDS-PAGE RP-HPLC）

保存條件：如果樣品在2-4周內(nèi)使用，可以在4°C低溫儲(chǔ)存。 

長(zhǎng)期儲(chǔ)存，建議添加載體蛋白（0.1％HSA或BSA），并儲(chǔ)存在-20~ -80°C。避免多次凍融。

PCNA蛋白；抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)重組蛋白

蛋白重組表達(dá)策略組合

重組蛋白的表達(dá)往往不像理論那樣一帆風(fēng)順，在實(shí)際的表達(dá)過(guò)程中有可能產(chǎn)生各種各樣的問(wèn)題。在選擇一個(gè)的蛋白表達(dá)策略非常困難的情況下，那么采用看似笨拙的方法，有可能會(huì)成為一種意想不到的“成功捷徑”，比如項(xiàng)目要求構(gòu)建表達(dá)兩種重組蛋白時(shí)，構(gòu)建6種不同的表達(dá)質(zhì)粒，意味著有36種不同的表達(dá)條件組合，通過(guò)高通量微量蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)一次性就可獲得蛋白表達(dá)條件組合，后續(xù)中式飛行試驗(yàn)和成本控制會(huì)變得相對(duì)容易。

蛋白原核重組表達(dá)服務(wù)具體流程

PCNA蛋白；抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)重組蛋白融合標(biāo)簽選擇：

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.  選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞（常用的CHO和HEK293）

b.  表達(dá)載體的構(gòu)建

c.  無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.  細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

e.  表達(dá)小試，條件優(yōu)化

f.  表達(dá)分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.  大量表達(dá)

h.  親和純化

i.  檢測(cè)和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.  選擇表達(dá)載體

b.  密碼子優(yōu)化

c.  基因合成/亞克隆

d.  轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.  蛋白表達(dá)小試分析

f.  如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.  如果蛋白不可溶，則需要變復(fù)性來(lái)制備可溶蛋白。

h.  鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

PCNA蛋白；抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)重組蛋白表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)

誘導(dǎo)表達(dá)成功后，表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng)，按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒(méi)太大的問(wèn)題。

雖然，在大腸桿菌中表達(dá)的蛋白由于缺少高級(jí)修飾和糖基化、磷酸化等翻譯后加工，常形成包涵體而影響表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性及構(gòu)象等缺點(diǎn)，但原核表達(dá)具有的操作簡(jiǎn)單、快捷，需時(shí)較短，表達(dá)產(chǎn)量高，適合工業(yè)化等優(yōu)點(diǎn)，仍是我們合成外源蛋白的選擇。原核表達(dá)的全過(guò)程有許多不確定因素，所以每完成一步都得檢驗(yàn)結(jié)果是否正確，當(dāng)實(shí)驗(yàn)遇到困難時(shí)如何進(jìn)行分析，找到問(wèn)題的癥結(jié)是我們實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。