PCNA蛋白；抗增殖細胞核抗原(PCNA)重組蛋白

英文名稱：Recombinant Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA)

Cyclin

來源：原核表達

宿主：E.coli

規(guī)格：10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內(nèi)毒素水平： 1.0EU/μg(LAL法測定)具體詳見說明書

片段與標簽：Leu6~Ser261 with N-terminal His and GST Tag

物種來源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種）相同的名稱，不同的物種。

PCNA蛋白；抗增殖細胞核抗原(PCNA)重組蛋白性狀：凍干粉

表達系統(tǒng)：  大腸桿菌

產(chǎn)品純度： 95%-98%（SDS-PAGE RP-HPLC）

保存條件：如果樣品在2-4周內(nèi)使用，可以在4°C低溫儲存。 

長期儲存，建議添加載體蛋白（0.1％HSA或BSA），并儲存在-20~ -80°C。避免多次凍融。

PCNA蛋白；抗增殖細胞核抗原(PCNA)重組蛋白

蛋白重組表達策略組合

重組蛋白的表達往往不像理論那樣一帆風順，在實際的表達過程中有可能產(chǎn)生各種各樣的問題。在選擇一個的蛋白表達策略非常困難的情況下，那么采用看似笨拙的方法，有可能會成為一種意想不到的“成功捷徑”，比如項目要求構(gòu)建表達兩種重組蛋白時，構(gòu)建6種不同的表達質(zhì)粒，意味著有36種不同的表達條件組合，通過高通量微量蛋白表達實驗一次性就可獲得蛋白表達條件組合，后續(xù)中式飛行試驗和成本控制會變得相對容易。

蛋白原核重組表達服務(wù)具體流程

PCNA蛋白；抗增殖細胞核抗原(PCNA)重組蛋白融合標簽選擇：

親和標簽：蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類：一類是短肽類標簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟：

a.  選擇表達載體和宿主細胞（常用的CHO和HEK293）

b.  表達載體的構(gòu)建

c.  無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.  細胞瞬時轉(zhuǎn)染

e.  表達小試，條件優(yōu)化

f.  表達分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.  大量表達

h.  親和純化

i.  檢測和鑒定

原核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟：

a.  選擇表達載體

b.  密碼子優(yōu)化

c.  基因合成/亞克隆

d.  轉(zhuǎn)化表達菌株

e.  蛋白表達小試分析

f.  如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.  如果蛋白不可溶，則需要變復性來制備可溶蛋白。

h.  鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

PCNA蛋白；抗增殖細胞核抗原(PCNA)重組蛋白表達蛋白的分析、純化、檢測

誘導表達成功后，表達蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當，按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

雖然，在大腸桿菌中表達的蛋白由于缺少高級修飾和糖基化、磷酸化等翻譯后加工，常形成包涵體而影響表達蛋白的生物學活性及構(gòu)象等缺點，但原核表達具有的操作簡單、快捷，需時較短，表達產(chǎn)量高，適合工業(yè)化等優(yōu)點，仍是我們合成外源蛋白的選擇。原核表達的全過程有許多不確定因素，所以每完成一步都得檢驗結(jié)果是否正確，當實驗遇到困難時如何進行分析，找到問題的癥結(jié)是我們實驗的關(guān)鍵。