Benzonase核酸酶Benzonase核酸酶，是一種核酸內(nèi)切酶，可將核酸降解成2~5個(gè)堿基的5‘單磷酸核苷酸，因其能高效降解任何形式（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀）的DNA和RNA而沒(méi)有蛋白裂解活性，又被稱為“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白樣品粘度，去除蛋白樣品中核酸的污染，且無(wú)蛋白酶活性殘留，核酸酶活性達(dá)1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同時(shí)， 也具有多種其他用途，如：減少了樣品處理時(shí)間，增加了蛋白產(chǎn)量，離心時(shí)時(shí)沉淀和上清分離的更徹底，更便于溶液的離心（尤其是超濾）；提高色譜純化的效率等。 
本公司Benzonase核酸酶包括四種，分別為不含任何標(biāo)簽的Benzonase核酸酶（科研級(jí)別）、無(wú)內(nèi)毒素Benzonase核酸酶、Strep tagII Benzonase核酸酶（科研級(jí)別）和無(wú)內(nèi)毒素的Strep tagII Benzonase核酸酶，可適應(yīng)不同下游用途的需求。其中Strep tagII Benzonase核酸酶可在消化完核酸后通過(guò)Strep Tactin XT Resin高效去除，而無(wú)內(nèi)毒素的兩種Benzonase核酸酶，內(nèi)毒素含量 40EU/mL（按照單位換算量計(jì)算為，每1000U中含有的內(nèi)毒素 0.15EU），可適用于藥用級(jí)別的研發(fā)和生產(chǎn)。另外，核酸酶殘留可通過(guò)我公司開(kāi)發(fā)的基于 熒光探針的Benzonase核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒進(jìn)行評(píng)測(cè)，15min即可完成檢測(cè)，低可檢測(cè)到2ng/ml的核酸酶殘留。

用量推薦實(shí)驗(yàn)類型電泳蛋白樣品制備非藥物蛋白生產(chǎn)藥物蛋白生產(chǎn)疫苗、病毒生產(chǎn)細(xì)胞藥物推薦產(chǎn)品Benzonase(科研級(jí))Benzonase(科研級(jí))Strep-tagII Benzonase(科研級(jí))Benzonase(無(wú)內(nèi)毒素級(jí))Strep-tagII Benzonase(無(wú)內(nèi)毒素級(jí))細(xì)胞數(shù)量1X106個(gè)細(xì)胞(10mg組織)1g濕重 （重懸液10mL）1L 發(fā)酵上清液1L 培養(yǎng)物低用量125U (0.5 μL)25U/mL(1 μL)25U/mL(1 μL)0.1U/mL(0.4 μL)0.1U/mL(0.4 μL)推薦用量500U (2 μL)250U/mL(10 μL)250U/mL(10 μL)25U/mL(100 μL)5U/mL(20 μL)作用時(shí)間通常作用時(shí)間37℃在15~60min；25℃在30~120min；單位定義37℃，pH 8.0反應(yīng)條件下，在30分鐘內(nèi)使△A260 值降低1.0(相當(dāng)于完全消化37 μg DNA )的酶量定義為一個(gè)活性單位。
注意：含大量蛋白、細(xì)胞壁、其它鹽分的粗制品，對(duì)該酶活性有部分抑制作用，使用時(shí)需要增加酶的用量。應(yīng)用

蛋白提取時(shí)去除核酸污染：在重組蛋白純化或組織細(xì)胞樣品蛋白提取時(shí)，Benzonase核酸酶可有效降低樣品粘度，利于下游操作

與細(xì)胞或細(xì)菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量

減少存放的外周血單細(xì)胞(PBMC)的結(jié)塊現(xiàn)象

降解核酸，利于不可溶性蛋白復(fù)性前高質(zhì)量包涵體制備

有效去除帶負(fù)電荷的核酸對(duì)雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響，改善蛋白質(zhì)的分離效果，增強(qiáng)2-DE分辨率

疫苗和病毒樣品制備中DNA污染的去除儲(chǔ)存置于-20°C，可保存2年。實(shí)例分析Fig1. 分別取不同量（0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U）的Benzonase核酸酶消化人基因組DNA10min，進(jìn)行瓊脂糖電泳。Fig2. A為未加Benzonase處理的，B為加Benzonase處理的
樣品進(jìn)行二維電泳。如圖所示，Benzonase處理的樣品可顯
著增加二維電泳的分辨率。 Fig3.經(jīng)RIPA裂解未經(jīng)Benzonase核酸酶處理的樣品，
大量基因組DNA釋放出來(lái)，呈鼻涕狀。Fig4.離心后，左管為未加Bezonase核酸酶，有鼻涕狀
粘稠物質(zhì)懸浮在管中，右管為加Bezonase核酸酶，上
清為透明液體。超強(qiáng)兼容性全能核酸酶在非常廣泛的條件下，都能保持很高的穩(wěn)定性和消化核酸的活性，這使其能夠與多種細(xì)胞裂解液，如RIPA，或含有多種離子和非離子型去污劑、還原劑的蛋白提取試劑等兼容。例如： 100mM的鹽酸胍會(huì)完全抑制Benzonase活性，1mM的EDTA會(huì)部分抑制Benzonase活性，5mM的EDTA會(huì)使活性喪失90%，1mM的PMSF則不會(huì)抑制核酸酶活性。 濃度 0.4%的Triton X-100對(duì)核酸酶活性幾乎無(wú)影響， 0.4%的脫氧膽酸鈉使核酸酶可保持70%的活性，超過(guò)該臨界值之后核酸酶活性會(huì)急劇降低，1%的濃度會(huì)使活性喪失70%；0.05%的SDS對(duì)核酸酶活性幾乎無(wú)影響，而SDS濃度在0.1%-1%之間時(shí)，核酸酶在變性后活性會(huì)急劇降低，可通過(guò)增加核酸酶的量使活性得到補(bǔ)償。另外，核酸酶可耐受6M尿素，當(dāng)尿素達(dá)到7M時(shí)，核酸酶在變性后活性會(huì)急劇降低，亦可通過(guò)增加核酸酶的量使活性得到補(bǔ)償。條件參數(shù)最適條件可作用條件范圍Mg2+1-2mM1-10mMpH8.0–9.26–10溫度37°C0–42°CDTT0–100mM 100mMβ-Mercaptoethanol0–100mM 100mM一價(jià)陽(yáng)離子濃度（如Na+，K+）0–20mM0–150mMPO43-0–10 mM0–100mMBenzonase的去除對(duì)于Strep-tag II標(biāo)簽的Benzonase核酸酶（C2003，C2004）可通過(guò)Strep Tactin XT Resin（聯(lián)邁生物，C0402）直接 去除，去除率 95%；對(duì)于不帶標(biāo)簽的Benzonase核酸酶（C2001，C2002），可通過(guò)色譜純化去除核酸酶，然后可通過(guò)檢測(cè)殘留活性（聯(lián)邁生物, C2005）或ELISA檢測(cè)來(lái)判斷去除是否成功。常見(jiàn)的色譜純化方式有陽(yáng)離子交換介質(zhì)和陰離子交換介質(zhì)，具體的Benzonase去除條件如下表：陰離子交換介質(zhì)pH樣品和平衡緩沖液Benzonase核酸酶TMAE7.050mM Tris/200mM NaClnot boundTMAE7.050mM Tris/50mM NaClnot boundTMAE8.050mM Tris/250mM NaClnot boundTMAE8.0 50mM Tris/100mM NaClnot boundTMAE9.0 50mM Tris/200mM NaClnot boundTMAE9.050mM Tris/100mM NaClnot boundDEAE7.050mM Tris/200mM NaClnot boundDEAE7.050mM Tris/50mM NaClnot boundDEAE8.050mM Tris/250mM NaClnot boundDEAE8.0 50mM Tris/100mM NaClnot boundDEAE9.0 50mM Tris/250mM NaClnot boundDEAE9.050mM Tris/50mM NaClnot boundDMAE8.0 50mM Tris/250mM NaClnot boundDMAE8.050mM Tris/50mM NaClnot bound陽(yáng)離子交換介質(zhì)pH樣品和平衡緩沖液Benzonase核酸酶SO3-6.020mM phosphate/100mM NaClboundSO3-6.020mM phosphate/200mM NaClnot boundSO3-5.020mM acetate/200mM NaClboundSO3-5.0 20mM acetate/700mM NaClnot boundSO3-4.0 20mM acetate/300mM NaClboundSO3-4.020mM acetate/800mM NaClnot boundC00-6.020mM phosphate/0mM NaClnot boundC00-5.020mM acetate/40mM NaClboundC00-5.020mM acetate/100mM NaClnot boundC00-4.0 20mM acetate/150mM NaClpartially boundC00-4.020mM acetate/400mM NaClnot bound