轉(zhuǎn)基因大豆品系FG72核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）

轉(zhuǎn)基因大豆品系 FG72 核酸檢測試劑盒（一管式 PCR-熒光探針法）

◆ 產(chǎn)品說明

轉(zhuǎn)基因檢測系列可針對(duì)食品、飼料等樣品中轉(zhuǎn)基因成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增

曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于轉(zhuǎn)基因大豆品系 FG72 基因成分的檢測，檢出限為 0.1%。

◆ 產(chǎn)品組成（96 測試）

試劑 含量

A-FG72-P 20μL × 8 管× 12 排

NG -P 100μL × 3 支

PG-FG72-P 100μL × 2 支

◆ 適用儀器

ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀。

◆ 自備耗材和儀器

①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；③離心機(jī)；④渦旋混勻器；⑤金屬

浴；⑥均質(zhì)機(jī)、攪拌機(jī)或研缽等研磨器具；⑦電子天平。

◆ 注意事項(xiàng)

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。

1）一區(qū)：樣本制備區(qū)。

2）第二區(qū)：模板添加區(qū)。

3）第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★ 分區(qū)之間好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2．實(shí)驗(yàn)過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。

3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書要求在冰盒上操作。

4．反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心 30

秒，并按檢測頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆ 樣品處理

參照《GB/T 19495.3-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 核酸提取純化方法》或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，除了處于食物和（或）

飼料鏈起始端的農(nóng)產(chǎn)品和粗加工材料（如粉碎的產(chǎn)品），大多數(shù)工業(yè)加工的食品經(jīng)過了物理、化學(xué)及酶的處理。這

些處理會(huì)降低 DNA 的含量及純度。因此，每一方法的適用性及重復(fù)性會(huì)隨特異樣品而異，一種特定的 DNA 提取方

法的性質(zhì)特征依賴于被研究的食品種類。實(shí)驗(yàn)室樣品的代表性應(yīng)符合《GB/T 19495.7-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 抽樣和

制樣方法》。制備的樣本保存待用。

詳細(xì)步驟請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作或查閱食安通軟件。

★ 若使用非一次性研磨器研磨樣品，一定要徹底清洗研磨器并充分干燥后再進(jìn)行下一份樣品的研磨，防止交叉污染。

◆ 實(shí)驗(yàn)操作

1.模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套植物基因組 DNA 提取試劑盒，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進(jìn)行）

剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的 PCR 管，放置在室溫待解凍后，離心 30 秒后揭開封口膜，向每管反應(yīng)液

中分別加入 5μL 模板，順序?yàn)?NG、待測樣品模板、PG-FG72-P。蓋好配套的 PCR 管蓋后，渦旋混勻 30s，離心 1min，

立即進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。

3.擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）

使用熒光定量 PCR 儀，熒光基團(tuán)選擇 FAM，淬滅基團(tuán)選擇 TAMRA。

按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)：

PCR 循環(huán) 熒光收集位點(diǎn)

95℃ 10 分鐘 1 個(gè)循環(huán) —

95℃ 15 秒

45 個(gè)循環(huán)

—

60℃ 1 分鐘 ※

4. 基線和閾值設(shè)定

基線調(diào)整取 3-15 個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)，閾值線應(yīng)超過陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線的高點(diǎn)

◆ 結(jié)果判定

檢測樣品無 Ct 值或≥45，曲線為直線或輕微斜線，無“S”型擴(kuò)增曲線，可報(bào)告樣品陰性，不含有 FG72 基因或

含量低于檢出限；

檢測樣品 Ct≤40，曲線呈“S”型擴(kuò)增曲線，可直接報(bào)告樣品陽性，含有 FG72 基因；

檢測樣品 40＜Ct＜45，需進(jìn)行一次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，若 Ct 值仍處于 40 和 45 之間且呈“S”型擴(kuò)增曲線，同時(shí)各種實(shí)驗(yàn)

對(duì)照結(jié)果正常，報(bào)告樣品陽性，否則報(bào)告樣品陰性。

★NG 反應(yīng)為平滑直線，PG 反應(yīng)為“S”型擴(kuò)增曲線，此次檢測結(jié)果有效，否則無效。如重復(fù)檢測結(jié)果仍為無效，請(qǐng)與技術(shù)支持人

員聯(lián)系。