CTSB蛋白；組織蛋白酶B(CTSB)重組蛋白

英文名稱：Recombinant Cathepsin B (CTSB)

CTS-B; APPS; CPSB; APP secretase

來源：原核表達

宿主：E.coli

規(guī)格：10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內(nèi)毒素水平： 1.0EU/μg(LAL法測定)具體詳見說明書

片段與標簽：Val129~Gln333 (Accession # P00787) with N-terminal His Tag

物種來源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種）相同的名稱，不同的物種。

性狀：凍干粉

表達系統(tǒng)：  大腸桿菌

產(chǎn)品純度： 95%-98%（SDS-PAGE RP-HPLC）

保存條件：如果樣品在2-4周內(nèi)使用，可以在4°C低溫儲存。

CTSB蛋白；組織蛋白酶B(CTSB)重組蛋白操作步驟

1．用緩沖液A漂洗菌體細胞（10ml/g）, 離心6000g×15min，收集菌體細胞，重復此步驟，將菌體細胞再在緩沖液A中洗滌一次。

2．將漂洗過的菌體細胞懸浮于緩沖液B中，超聲破碎，鏡檢，破碎率高于95%，離心1500g×30min，收集包涵體沉淀。

3．將包涵體沉淀用緩沖液Ⅰ、緩沖液Ⅱ、緩沖液Ⅲ分別超聲洗滌一次，1500g 離心收集包涵體沉淀。

4．包涵體的溶解：用含高濃度脲素的緩沖液室溫放置30min，然后離心1500g×30min，留上清。將溶解后的蛋白質(zhì)適當稀釋，磁力攪拌，透析過夜。

5．溶解后的包涵體蛋白可通過親和層析進一步純化。

如果CTSB蛋白；組織蛋白酶B(CTSB)重組蛋白沒有表達很有可能的原因有兩個:

1.載體構(gòu)建錯誤。 另外有些酶產(chǎn)生粘端有些酶產(chǎn)生平端，這些都容易導致讀碼框錯誤，從而表達不出來。抗生素抗性/載體多次傳代，特性發(fā)生變化；

2.宿主菌選擇不當。不同的宿主菌其基因型是不一樣的。有些經(jīng)過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動子的載體，必須選擇合適的宿主菌進行表達。因此，當你的蛋白沒有表達出來時，可以考慮更換宿主菌；

至于是否選擇rosetta菌株，我認為倒不是最關(guān)鍵的：Rosetta的功能是補充6種稀有密碼子對應(yīng)的tRNA，提高外源基因，特別是真核基因在原核中的表達水平。Rosetta會提高表達水平，不會對蛋白的表達起有或無的影響。

另外，需要確定你所有試劑準確無誤，我自己在早期實驗的時候，有的試劑是實驗室傳下來的，有些是問別人借的，其中載體，宿主菌以及抗生素都出現(xiàn)過問題，你要確定你用的試劑來源和性質(zhì)沒有問題，這個非常關(guān)鍵。

多肽的融合表達純化服務(wù)：擅長做多肽（小于10kDa）的融合表達純化，通過蛋白酶去除融合標簽蛋白，最終獲得高純度的小肽，氨基酸序列與天然多肽一致。

蛋白原核的可溶表達純化：通過與融合標簽融合表達，以及通過表達菌株及表達條件的優(yōu)化，使得目的CTSB蛋白；組織蛋白酶B(CTSB)重組蛋白以可溶的形式表達，進而放大純化。

包涵體變復性：原核表達優(yōu)化后仍然是包涵體，通過對包涵體的洗滌，去除大量的雜蛋白，用變性劑變性，對復性條件進行優(yōu)化，獲得復性蛋白。