血凝和血凝抑制試驗(yàn)

某些病毒能夠與人或動(dòng)物的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，這稱之為紅細(xì)胞凝集反應(yīng)（HA）。這種凝集反應(yīng)克被加入的特異性血清所抑制，即為紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI）。
1、材料

器材：V型96孔微量滴定板，微量混合器，塑料采血管，50毫升移液管。

稀釋液：用蒸餾水或無離子水配成0.85%氯化鈉溶液（生理鹽水），高壓滅菌備用。

抗原：由指定單位提供

紅細(xì)胞：采健康成年公雞血，抗凝，用20倍量生理鹽水洗滌3-4次，每次以2000轉(zhuǎn)/分離心3-4分鐘，zui后一次5分鐘，配成1%或0.5%懸液備用。

血清：標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清，被檢血清（從被檢雞的翅靜脈或心臟采血，分離血清備用）

2、操作方法

微量血凝試驗(yàn)（HA） 將V型血凝板的每孔中滴加生理鹽水0.05毫升，共滴四排。吸取1：5稀釋抗原滴加于*列孔，每孔0.05毫升；然后，由左至右順序倍比稀釋至第11列孔，再?gòu)牡?1列孔各吸0.05毫升棄去，zui后一列不加抗原作對(duì)照。于每孔中加入0.5%紅細(xì)胞懸液0.05毫升。置于微型混合器上震蕩1分鐘，或用手持血凝板繞圈混勻。放室溫下（18~20℃）30~40分鐘，根據(jù)血凝圖像判定結(jié)果。以出現(xiàn)完全凝集的抗原zui大稀釋度為該抗原的血凝滴度，每次四排重復(fù)，以幾何均值表示結(jié)果。計(jì)算出含4個(gè)血凝單位的抗原濃度。計(jì)算公式為：抗原應(yīng)稀釋倍數(shù)=血凝滴度/4。

3、微量血凝抑制試驗(yàn)

常用固定病毒稀釋血清法，在96孔V型板上進(jìn)行，用50微升移液管加樣和稀釋。先取生理鹽水0.05毫升，加入第1孔，再取濃度為4個(gè)血凝單位的抗原依次加入3~12孔，每孔0.05毫升，第2孔加濃度為8個(gè)血凝單位的抗原0.05毫升。用稀釋器吸被檢血清0.05毫升于第1孔（血清對(duì)照）中，擠壓混勻后吸被檢血清0.05毫升于第1孔（血清對(duì)照）中，擠壓混勻后吸0.05毫升于第二孔，依次倍比稀釋至第12孔，zui后棄去0.05毫升。至室溫（18~20℃）下作用20分鐘。用稀釋器滴加0.05毫升紅細(xì)胞懸液于各孔中，振蕩混勻后，室溫下靜置30~40分鐘，判定結(jié)果。每次測(cè)定應(yīng)設(shè)已知滴度的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清對(duì)照。

4、結(jié)果判定

在對(duì)照出現(xiàn)正確結(jié)果的情況下，完全抑制紅細(xì)胞凝集的zui大稀釋度為該血清的血凝抑制滴度。 （來源：上海銳聰實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）

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