RACE實(shí)驗(yàn)原理

RACE 是采用PCR 技術(shù)由已知的部分cDNA 順序來擴(kuò)增出完整cDNA5 和3 末端,是一種簡便而有效的方法, 又被稱為錨定 PCR (anchoredPCR)和單邊PCR(one2side PCR)。
3 RACE
利用mRNA的3 末端的poly（A）尾巴作為一個引物結(jié)合位點(diǎn)，以連有SMART寡核營酸序列通用接頭引物的Oligo（dT）30MN作為鎖定引物反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)*鏈cDNA.然后用一個基因特異引物GSP1（gene specific primer，GSP）作為上游引物，用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作為下游引物，以cDNA*鏈為模板，進(jìn)行PCR循環(huán)，把目的基因3 末端的DNA片段擴(kuò)增出來。

5 RACE
先利用mRNA的3 末端的poly（A）尾巴作為一個引物結(jié)合位點(diǎn)，以O(shè)ligo（dT）30MN作為鎖定引物在反轉(zhuǎn)錄酶MMLV作用下，反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)*鏈cDNA.利用該反轉(zhuǎn)錄酶具有的末端轉(zhuǎn)移酶活性，在反轉(zhuǎn)錄達(dá)到*鏈的5 末端時(shí)自動加上3-5個（dC）殘基，退火后（dC）殘基與含有SMART寡核苷酸序列Oliogo（dG）通用接頭引物配對后，轉(zhuǎn)換為以SMART序列為模板繼續(xù)延伸而連上通用接頭（見Figure 2 ）。然后用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作為上游引物，用一個基因特異引物2（GSP 2 genespecific primer，GSP）作為下游引物，以SMART*鏈cDNA為模板，進(jìn)行PCR循環(huán)，把目的基因5 末端的cDNA片段擴(kuò)增出來。最終，從2個有相互重疊序列的3 / 5 -RACE產(chǎn)物中獲得全長cDNA，或者通過分析RACE產(chǎn)物的3 和5 端序列，合成相應(yīng)引物擴(kuò)增出全長cDNA。

實(shí)驗(yàn)流程：
1、總RNA提取以及cDNA反轉(zhuǎn)錄
2、根據(jù)已知序列設(shè)計(jì)引物，以cDNA模板進(jìn)行擴(kuò)增，驗(yàn)證序列正確性
3、RACE 擴(kuò)增，并測序，使用錨定PCR（AnchoredPCR）與巢式PCR（Nested PCR）相結(jié)合的方法，分別進(jìn)行3 末端和5 末端RACE并對其產(chǎn)物進(jìn)行測序
4、根據(jù)測序結(jié)果拼接目的基因全長cDNA序列
5、將RACE產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆用于后續(xù)研究（可根據(jù)客戶要求自行選擇）

服務(wù)優(yōu)勢
采用進(jìn)口試劑,確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性
較同類產(chǎn)品方法更快速，便捷
豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，超過500例的成功案例
提供全套的后續(xù)生物信息學(xué)分析服務(wù)（可根據(jù)客戶要求提供個性化分析服務(wù)）

服務(wù)流程
1、確認(rèn)客戶提供的序列信息
2、評估RACE實(shí)驗(yàn)可行性
3、確認(rèn)樣本信息
4、根據(jù)客戶提供的信息設(shè)計(jì)好實(shí)驗(yàn)方案，銷售做出報(bào)價(jià)合同
4、客戶確定無誤后簽訂《沃森生物-RACE檢測服務(wù)合同》，并簽字（或蓋章）
5、支付預(yù)付款，服務(wù)正式啟動
6、根據(jù)合同實(shí)驗(yàn)方案開展實(shí)驗(yàn)
8、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，發(fā)送初步實(shí)驗(yàn)報(bào)告
9、支付實(shí)驗(yàn)尾款
10、提供詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告，完成實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

材料提交說明
實(shí)驗(yàn)樣品
1、組織或者細(xì)胞：提供盡可能多的新鮮組織或細(xì)胞樣品(包括3個技術(shù)重復(fù))，組織樣品不少于200 mg，細(xì)胞至少107個
2、RNA樣品：3 RACE：Total RNA 15 g；5 RACE：Total RNA 25 g（注：OD260/OD280在1.9-2.1之間，完整性好)

序列信息：
1、大于200bp的已知序列(請注明已知序列的5 端及3 端)：如果已知序列比較短，建議先進(jìn)行3 RACE再進(jìn)行5 RACE，以提高實(shí)驗(yàn)的成功率
2、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和參考文獻(xiàn)：這將會幫助我們更好地理解您的實(shí)驗(yàn)背景，有利于實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行

結(jié)果交付
實(shí)驗(yàn)結(jié)題報(bào)告：包括實(shí)驗(yàn)步驟，引物信息，實(shí)驗(yàn)過程 PCR產(chǎn)物照片，全長序列拼接結(jié)果；
測序原始數(shù)據(jù)：測序彩色波形圖、堿基序列圖；
實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物：引物、PCR產(chǎn)物、測序用質(zhì)粒（限產(chǎn)生克隆測序的情況）。

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