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產(chǎn)品簡(jiǎn)介 品牌 其他品牌 貨號(hào) HE31153-R 規(guī)格 50T 供貨周期 現(xiàn)貨 主要用途 僅用于科研 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè) 唾液乳酸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家定義:在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)的變化,通過(guò)儀器軟件實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,通過(guò)Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量分析。
詳細(xì)介紹
唾液乳酸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
普通PCR反應(yīng)流程:
?
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 L、20
L、200 L、1000 L)。
2.耗材:熒光 PCR 專用反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 L、200 L、1000 L)、滅菌雙蒸水。
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份拉
產(chǎn)品名稱
唾液乳酸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家
英文名稱
Lactobacillus salivariusPCR
編號(hào)
HE31153-R
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3 端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3 端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
LAMR1(CT) 層粘連蛋白受體1體(C端)進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)VHLH/Von Hippel Lindau 視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白體(逢希伯-林道氏?。?/p>
Myf6 生肌調(diào)節(jié)因子6體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)Cyclin B3 周期B3體
MFAP3L 微絲相關(guān)蛋白3樣體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CCNDBP1/GCIP 周期D結(jié)合蛋白1體
MICA/MHC I MHC I類鏈相關(guān)蛋白A/組織相容性復(fù)合物1體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)AFF4 淋巴細(xì)胞相關(guān)AF4樣蛋白體
MHC class I antigen B 15 組織相關(guān)原HLA-B15體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)Cyclin K/CCNK 周期K體
Microsporidia protien 蜜蜂微孢子蟲(chóng)蛋白體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)Cyclin L/CCNL1 周期L體
Midnolin isoform Protein 1 中核仁蛋白1體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CCNYL1 周期樣Y1體BR,98%99%5gHpt;HP鑒別Anti-BMP3 骨形態(tài)發(fā)生蛋白3體Anti-BMP3 骨形態(tài)發(fā)生蛋白3體48T/96T99.99% metals basis25gCOL 2
80%99%100g -DF含量測(cè)定Anti-BMP4 骨形態(tài)發(fā)生蛋白4體Anti-BMP4 骨形態(tài)發(fā)生蛋白4體48T/96T99.99% metals basis5gTE
80%99%25g Actin鑒別Anti-BMP6 骨形態(tài)發(fā)生蛋白6體Anti-BMP6 骨形態(tài)發(fā)生蛋白6體48T/96TAR100gTE
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