廣州輝駿生物科技有限公司，成立于2008年，位于廣州市科學城，是一家由在生物醫(yī)藥領域具有資深科研資歷人才組建的創(chuàng)新型科技企業(yè)，致力于為生物醫(yī)藥企業(yè)、高校、科研機構、醫(yī)院及個人提供高品質(zhì)的技術服務。通過近十年的發(fā)展，公司擁有完善的分子生物，細胞生物，蛋白免疫，質(zhì)譜分析平臺，尤其擅長于蛋白質(zhì)組學與代謝組學，蛋白-蛋白，蛋白-核酸及核酸-核酸相互作用的篩選和驗證，及以此為基礎的整體課題服務。公司提供的實驗數(shù)據(jù)已在40余篇SCI文章中發(fā)表，其中蛋白質(zhì)組學權威期刊10余篇。

輝駿生物通過8年多精益求精的優(yōu)質(zhì)服務，我們已經(jīng)與中山大學、浙江大學、武漢大學、上海海洋大學、西南大學、廈門大學、廣州腫瘤醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學附屬第五醫(yī)院、華南植物研究所等全國100多家大中型科研院所建立廣泛密切的項目合作，不斷為他們提供優(yōu)質(zhì)的各類實驗科研技術服務。

輝駿生物以扎實的科學為基礎， 以引領性的技術為支撐，以開創(chuàng)性的精神為動力，為您提供整體實驗解決方案！

輝駿生物慢病毒感染預實驗：
慢病毒顆粒對不同細胞系的親嗜性不一，原代細胞或者難感染的細胞通常需要較高的MOI，因此建議首先用慢病毒對靶細胞進行預感染，設定不同的MOI梯度(1、10、100等)，以評估目的細胞的MOI。

實驗準備：

一塊96孔板，最大量程為10 L和100 L的移液槍各一支，小、中槍頭各一盒，1.5mL EP管若干個，polybrene、FItransfer和完全培養(yǎng)基。

A. 貼壁細胞的感染：
(1)培養(yǎng)細胞使其處于良好的生長狀態(tài)；在實驗前一天，將0.3 104~1.0 104個細胞接種至96孔板內(nèi)，每孔100 L培養(yǎng)基。
(2)待細胞匯合度為20%~50%之間時，可以使用慢病毒進行感染。
(3)預實驗可設置3組，分別為：完全培養(yǎng)基組、完全培養(yǎng)基+polybrene組、FItransfer組；polybrene的使用量為 5-10 g/mL之間，F(xiàn)Itransfer為輝駿生物開發(fā)的優(yōu)化過的助感染培養(yǎng)基，可直接當作感染完全培養(yǎng)基，無需額外添加其他助感染試劑，具有增強感染效率的作用；每組設置3個不同的MOI值，以尋找慢病毒感染的最適條件。
(4)病毒稀釋：實驗前準備2個1.5 mL的無菌EP管，將冰浴解凍的1 108的病毒液分別稀釋為10倍、100倍，具體操作步驟為：取10 L 1 108 TU/mL的病毒液加入90 L完全培養(yǎng)基中，則此時病毒液的滴度為1 107 TU/mL，病毒量為106TU；再從此溶液中吸取10 L病毒液加入90 L完全培養(yǎng)基中，此時病毒液的滴度為1 106 TU/mL，病毒量為105TU。吸取病毒液的過程中盡量避免產(chǎn)生泡沫。
(5)polybrene稀釋：polybrene的使用量為每孔5 g/mL，可預先加入完全培養(yǎng)基中。

(6)感染前，小心吸去培養(yǎng)基，每孔分別加入90 L對應的完全培養(yǎng)基或FItransfer；從三管不同滴度（1 108TU/mL、1 107TU/mL、1 106TU/mL）的病毒液中分別吸取10 L加入對應的孔中，即加入的病毒量分別為1 106 TU、1 105TU、1 104TU；每個孔內(nèi)液體的總體積為100 L，細胞的數(shù)目大約為1 104個，因此每組中3孔的MOI值分別為100、10、1。
(7)將培養(yǎng)基和病毒等試劑輕輕地充分混勻,之后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(8)感染8~16小時后觀察細胞狀態(tài)，棄去感染培養(yǎng)基，并加入100 L新鮮培養(yǎng)基。
(9)慢病毒感染3~4天后觀察熒光；如果細胞生長比較緩慢，可以適當延長觀察時間，如感染的慢病毒帶有抗性篩選元件,則可以開始換液加藥篩選。

輝駿生物懸浮細胞的感染：
(1)培養(yǎng)細胞使其處于良好的生長狀態(tài)；實驗第一天，離心收集細胞，并用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細胞，將0.5 103~1 103個細胞接種至96孔板內(nèi)，每孔90 L培養(yǎng)基； 次日按不同MOI值添加病毒液及助感染試劑和培養(yǎng)基。其余操作同貼壁細胞的感染步驟。
(2)如果該細胞株不易受慢病毒感染，可以使用離心孵化的方法。即在細胞培養(yǎng)板上加入病毒感染液后,以2500rpm(1000-1500g)在32℃或者室溫下離心90min。

輝駿生物慢病毒感染正式實驗：
按照換算原則，我們需要保持宿主細胞的MOI值不變，因此使用的病毒數(shù)目需要根據(jù)細胞數(shù)目的變化而做相應調(diào)整。也就是說，預實驗所用的是96孔板，每孔的底面積為0.3 cm ，需要的培養(yǎng)基總體積為100 L，假設宿主細胞的MOI值為10（每孔細胞數(shù)量為1 104個），加入的病毒量應為1 108 TU/mL的病毒1 L；正式實驗中，如果我們采用的是6孔板，每孔的底面積為10 cm ，需要的培養(yǎng)基總體積通常為1mL，則加入的的病毒量為1 108 TU/mL的病毒20 L。
另外，如果正式實驗的培養(yǎng)皿規(guī)格與預實驗的不同，則可以按照換算好的比例先小范圍感染一次，進一步確定感染時的最適慢病毒用量和細胞密度。

更多慢病毒實驗，請咨詢輝駿生物

廣州輝駿生物科技有限公司（簡稱 輝駿生物 ）成立于2008年，位于廣州市科學城，是一家由在生物醫(yī)藥領域具有資深科研資歷人才組建的創(chuàng)新型科技企業(yè)，致力于為生物醫(yī)藥企業(yè)、高校、科研機構、醫(yī)院及個人提供高品質(zhì)的技術服務。通過近十年的發(fā)展，公司擁有完善的分子生物，細胞生物，蛋白免疫，質(zhì)譜分析平臺，尤其擅長于蛋白質(zhì)組學與代謝組學，蛋白-蛋白，蛋白-核酸及核酸-核酸相互作用的篩選和驗證，及以此為基礎的整體課題服務。公司提供的實驗數(shù)據(jù)已在50余篇SCI文章中發(fā)表，其中蛋白質(zhì)組學權威期刊10余篇。