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目標(biāo)區(qū)域高通量測序介紹
目標(biāo)區(qū)域高通量測序是一種高度特異和靶向的方法，是指采用各種技術(shù)手段將待檢測的目標(biāo)區(qū)域富集之后，進(jìn)行高通量測序的研究策略。目標(biāo)區(qū)域的高深度測序可以有效識別基因的變異并對其進(jìn)行特征譜分析，通常用于分析特定基因組區(qū)域中的DNA變異，尤其是腫瘤的基因組研究。
目標(biāo)區(qū)域高通量測序的策略與區(qū)別
液相雜交捕獲
擴(kuò)增子測序
富集策略
探針雜交
多重PCR
適用范圍
100k 目標(biāo)區(qū)域 100M
目標(biāo)區(qū)域 100k
檢測變異類型
SNP、大片段Indels、融合基因、基因擴(kuò)增等。
SNP、小片段Indels、基因擴(kuò)增等
核酸起始量
100-200ng
50-100ng
優(yōu)勢
發(fā)現(xiàn)新的SNP、融合基因、大片段Indels等
常用于發(fā)現(xiàn)低頻突變(低于0.1%)，可用于ctDNA的研究
制約因素
探針捕獲效率
panel擴(kuò)增均一性
擴(kuò)增子測序
原理：通過設(shè)計目標(biāo)基因組區(qū)域的引物，經(jīng)多重PCR反應(yīng)擴(kuò)增將目標(biāo)區(qū)域DNA富集純化后，進(jìn)行高通量測序和數(shù)據(jù)分析。通常用于擴(kuò)增區(qū)域較?。?100k）的情況。
技術(shù)流程
技術(shù)優(yōu)勢
目標(biāo)區(qū)域小，測序成本較低，測序深度通?？筛哌_(dá)10000X（常規(guī)全外顯子組測序為100X），因此可以發(fā)現(xiàn)低頻的突變。
可選panel：包括現(xiàn)成產(chǎn)品（適合不同腫瘤的基因組合）和個性化定制兩種
Panel類型
50 gene
BRCA1/2
定制
適用腫瘤
所有腫瘤
乳腺癌
覆蓋基因組
覆蓋區(qū)域
熱點突變區(qū)
全外顯子區(qū)
擴(kuò)增子數(shù)目
207
148
Panel大小
40K
17K
panel名稱
適合腫瘤
適用樣本
應(yīng)用
50 gene panel
(可定制)
所有腫瘤
FFPE
從腫瘤組織切片中檢出腫瘤特異性低頻突變，可以應(yīng)用于腫瘤患者的靶向用藥指導(dǎo)、晚期患者的監(jiān)測、個體化治療的療效評估等。
血漿（ctDNA）
從ctDNA檢出腫瘤特異性低頻突變，可以應(yīng)用于腫瘤的超早期篩查、腫瘤患者的靶向用藥指導(dǎo)、晚期患者的監(jiān)測、個體化治療的療效評估等。
BRCA1/2 panel
乳腺癌
全血
檢測乳腺癌BRCA1/2易感基因上存在的致癌熱點突變。
樣品要求
1、樣品純度要求：OD值應(yīng)在1.8至2.0之間；電泳檢測無明顯非特異性雜帶，PCR產(chǎn)物條帶清晰、完整。
2、樣品濃度：純化后PCR產(chǎn)物濃度不低于5 ng/ul。
3、樣品總量：樣品總量不低于200ng。
4、樣品信息：請?zhí)峁〥NA樣品具體濃度、體積、制備時間、溶劑名稱及物種來源。請同時附上QC數(shù)據(jù)，包括電泳膠圖、分光光度或Nanodrop儀器檢測數(shù)據(jù)。
服務(wù)流程
1、提交項目課題相關(guān)需求和資料。
2、與我們的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊討論項目細(xì)節(jié)。
3、根據(jù)討論后的意見對實驗方案進(jìn)行修改。
4、雙方均滿意并達(dá)成一致，簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
5、開展實驗，按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
6、結(jié)題，提供實驗原始結(jié)果和分析結(jié)果、實驗流程、實驗條件等等。
我們的優(yōu)勢
1、游離DNA純化技術(shù)能有效去除基因組DNA污染，使定量更準(zhǔn)確。
2、擴(kuò)增子生成技術(shù)提高了擴(kuò)增子生成的均一性，降低測序成本。
3、低頻突變生物分析技術(shù)能有效在背景中檢出相關(guān)低頻突變。
4、為了克服PCR擴(kuò)增中引入的人源誤差，在進(jìn)行任何擴(kuò)增之前加入UMIs（unique molecular indices），從而保留起始DNA分子的wei一性并克服PCR擴(kuò)增帶來的假陽性問題，以及文庫構(gòu)建過程中引入的偏差。
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