逆轉(zhuǎn)錄病毒服務(wù)簡(jiǎn)介
逆轉(zhuǎn)錄病毒是一種RNA病毒,其最基本特征是:在生命過程中,該病毒有一個(gè)從RNA到DNA的逆轉(zhuǎn)錄過程。逆轉(zhuǎn)錄病毒在感染宿主細(xì)胞時(shí),會(huì)將自身基因組及其攜帶的外源基因整合入宿主基因組中,因此可以介導(dǎo)外源基因穩(wěn)定、長(zhǎng)期的表達(dá)。逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA的整合是病毒RNA復(fù)制的必經(jīng)階段。只有當(dāng)受感染的細(xì)胞處于細(xì)胞分裂期時(shí),逆轉(zhuǎn)錄病毒的DNA基因組才能接觸到宿主細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)。因此,逆轉(zhuǎn)錄病毒只能在分裂中的細(xì)胞中復(fù)制。
輝駿生物使用的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體基于莫洛尼鼠白血病病毒(MMLV),其基本骨架是pMXs,并帶有多種可選的篩選標(biāo)記。逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞為Plat-E,其內(nèi)含有病毒包裝組分,因此只需轉(zhuǎn)入單一的病毒表達(dá)載體即可包裝出攜帶外源基因的病毒顆粒,操作更加方便。
但是需要注意的是,Plat-E包裝出的逆轉(zhuǎn)錄病毒只能感染攜帶Slc7a受體的細(xì)胞, 因此僅適用于大鼠、小鼠的細(xì)胞系;若宿主細(xì)胞為其它物種的細(xì)胞,則需要首先用攜帶Slc7a受體基因的病毒感染該細(xì)胞系,使其攜帶Slc7a受體, 然后再用帶有外源目的基因的病毒感染相應(yīng)細(xì)胞系。
輝駿生物逆轉(zhuǎn)錄病毒技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目
表1 逆轉(zhuǎn)錄病毒服務(wù)項(xiàng)目及內(nèi)容
(2)逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝FG303過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建套餐目標(biāo)基因的模板(1)構(gòu)建載體
(2)逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝
(3)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株
特別提醒:
(1)基因過表達(dá)逆轉(zhuǎn)錄病毒服務(wù)適用于目標(biāo)基因長(zhǎng)度為2000bp以下的片段,2000bp以上的請(qǐng)具體咨詢;
(2)輝駿生物亦可進(jìn)行基因釣取和WB檢測(cè)服務(wù),但費(fèi)用不包含在總套餐之內(nèi),需根據(jù)實(shí)際情況收費(fèi);
(3)輝駿生物一般提供的病毒滴度在1 106~1 107 TU/mL之間,規(guī)格為1mL;
(4)Plat-E包裝出的逆轉(zhuǎn)錄病毒只能感染攜帶Slc7a受體的細(xì)胞, 因此只適用于大鼠、小鼠的細(xì)胞系。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果提交
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,輝駿生物會(huì)提交完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,包括:
1. 客戶定制的相應(yīng)載體、病毒液或穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株;
2. 逆轉(zhuǎn)錄病毒液滴度測(cè)定報(bào)告單;
3. 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的測(cè)序結(jié)果和峰圖、引物序列、載體圖譜;
4. 全部實(shí)驗(yàn)圖片;
5. 詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
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