技術(shù)文章 酵母雙雜交文庫(kù)構(gòu)建技術(shù)服務(wù) 閱讀：344 發(fā)布時(shí)間：2019/2/20

酵母雙雜交文庫(kù)構(gòu)建技術(shù)服務(wù)介紹
酵母雙雜交技術(shù)產(chǎn)生以來(lái)，主要應(yīng)用在以下幾個(gè)方向：
1、檢驗(yàn)一對(duì)功能已知蛋白間的相互作用。
2、 研究一對(duì)蛋白間發(fā)生相互作用所必需的結(jié)構(gòu)域。
3、 用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交cDNA文庫(kù)，以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的傳遞途徑。
4、分析新基因的生物學(xué)功能，即以功能未知的新基因去篩選文庫(kù)。通常依靠報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄激活來(lái)鑒定蛋白相互作用。將一個(gè)基因克隆到"誘餌"載體，并和GAL4蛋白的DNA結(jié)合域(DBD)表達(dá)為融合蛋白。將第二個(gè)基因或者編碼可能的相互作用子蛋白的cDNA文庫(kù)克隆到"獵物"載體，同GAL4的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)表達(dá)為融合蛋白。當(dāng)兩個(gè)蛋白相互作用時(shí)，AD和DBD間距離被拉近，從而激活報(bào)告基因的表達(dá)。
本服務(wù)項(xiàng)目使用infusion重組系統(tǒng)進(jìn)行重組，使用zhuan利的cDNA合成方法進(jìn)行cDNA的合成。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.1.RNA提取
1.2.mRNA分離
1.3.cDNA合成（使用酶促法直接合成，不經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增過(guò)程，比SMART方法質(zhì)量大大提高）
1.4.cDNA長(zhǎng)度分級(jí)
1.5.分級(jí)后的cDNA與酵母雙雜載體(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等載體，或者客戶指定載體)進(jìn)行infusion重組。
1.6.重組后產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
1.7.文庫(kù)鋪板檢測(cè)與菌液保存
1.8.文庫(kù)質(zhì)粒提取
產(chǎn)品內(nèi)容
我們提供構(gòu)建好的酵母文庫(kù)的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），文庫(kù)甘油菌，隨機(jī)克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫(kù)構(gòu)建報(bào)告，酵母雙雜交篩選相關(guān)細(xì)胞和質(zhì)粒。
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
3.1文庫(kù)庫(kù)容量：大于1*10^7CFU。
3.2平均插入片段：大于1.2Kbp。
3.3陽(yáng)性率：大于95%。
服務(wù)時(shí)間
20個(gè)工作日內(nèi)
備注1：該酵母文庫(kù)可以選擇增加均一化處理步驟，我們使用DSN法均一化方法，可以構(gòu)建出高質(zhì)量的均一化酵母雜交文庫(kù)，可以大大減少后續(xù)酵母篩選的工作量和篩選效率等。
提供的產(chǎn)品
詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告
酵母雙雜交（酵母單雜交）文庫(kù)質(zhì)粒、菌液
備注2：如果客戶需要轉(zhuǎn)化酵母，我們可提供100管酵母甘油菌工作液及母液（同clontech）。
服務(wù)周期
獲得合格的總RNA后25工作日，如需轉(zhuǎn)化酵母延長(zhǎng)15個(gè)工作日。
材料要求
客戶構(gòu)建指定的酵母雙雜交cDNA文庫(kù)，由客戶提供組織、細(xì)胞或總RNA給我們即可：細(xì)胞樣本：細(xì)胞數(shù)量大于1*10^7
動(dòng)物樣本：大于1g
物樣本：大于2g
總RNA：大于200u
服務(wù)流程 
1、提交項(xiàng)目課題相關(guān)需求和資料。 
2、與我們的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)討論項(xiàng)目細(xì)節(jié)。 
3、根據(jù)討論后的意見對(duì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行修改。 
4、雙方均滿意并達(dá)成一致，簽訂技術(shù)服務(wù)合同。 
5、開展實(shí)驗(yàn)，按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。 
6、結(jié)題，提供實(shí)驗(yàn)原始結(jié)果和分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)流程、實(shí)驗(yàn)條件等等。 
咨詢與訂購(gòu) 
感謝您選擇我們的服務(wù)，如果您有任何問(wèn)題，請(qǐng)聯(lián)系我們，我們將竭誠(chéng)為您解答和服務(wù)。

 

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