固相萃取是近年發(fā)展起來一種樣品預(yù)處理技術(shù)，由液固萃取和柱液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來，主要用于樣品的分離、純化和濃縮，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理過程，操作簡單、省時、省力。廣泛的應(yīng)用在醫(yī)藥、食品、環(huán)境、商檢、化工等領(lǐng)域。

固相萃取儀使用操作步驟

固相萃取儀針對填料保留機(jī)理的不同(填料保留目標(biāo)化合物或保留雜質(zhì))，操作稍有不同。固相萃取操作一般有四步:

1.填料保留目標(biāo)化合物活化----除去小柱內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。

萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml溶劑沖洗濾膜使SPE填料保持濕潤，因為填料干燥會降低樣品保留值，而各小柱的干燥程度不一，也會影響回收率的重現(xiàn)性。先用甲醇等水溶性有機(jī)溶劑沖洗填料，因為甲醇能潤濕吸附劑表面，并滲透到非極性的硅膠鍵合相中，使硅膠更容易被水潤濕；然后再加入水或緩沖液沖洗，創(chuàng)造和樣品溶劑相容的環(huán)境并提高回收率。

上樣----將樣品用一定的溶劑溶解，轉(zhuǎn)移入柱并使組分保留在柱上。

一般可采取以下四種方法：

(1)用0.1mol/L酸或堿調(diào)節(jié)，使pH9，離心取上層液萃??；

(2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，以水或緩沖液稀釋后萃?。?/p>

(3)用酸或無機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，調(diào)節(jié)pH值后萃??；

(4)超聲15min后加入水、緩沖液，取上清液萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min，流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。

淋洗----最大程度除去干擾物。

反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液，可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個小柱的容積，而SPE濾膜為5～10ml。

洗脫----用小體積的溶劑將被測物質(zhì)洗脫下來并收集。

應(yīng)選用5～10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度，則可先將洗脫液揮干后，再用流動相重組殘留物后進(jìn)樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水，可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物，再用極性較強(qiáng)的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物。

若待測物可電離，可調(diào)節(jié)pH值，抑制樣品離子化，以增強(qiáng)待測物在反相SPE填料中的保留，洗脫時調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫，收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達(dá)到最佳分離效果。在洗脫過程中應(yīng)減慢流速，用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫，回收率更高。

2.填料保留雜質(zhì)

固相萃取操作一般有三步:

活化--除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。

上樣--將樣品轉(zhuǎn)移入柱，此時大部分目標(biāo)化合物會隨樣品基液流出，雜質(zhì)被保留在柱上，開始收集。

洗脫---用小體積的溶劑將組分淋洗下來并收集，合并收集液。

此種情況多用于食品或農(nóng)殘分析中去除色素。

固相萃取儀的使用操作的簡要過程

1.一個樣品包括分離物和干擾物通過吸附劑；

2.吸附劑選擇性的保留分離物和一些干擾物，其他干擾物通過吸附劑；

3.用適當(dāng)?shù)娜軇┝芟次絼?，使先前保留的干擾物選擇性的淋洗掉，分離物保留在吸附劑床上；

4.純化、濃縮的分離物從吸附劑上淋洗下來。

固相萃取儀的使用操作注意事項

不正確的使用固相萃取儀會導(dǎo)致觸電或火災(zāi)事故。為防止發(fā)生危險情況，請在安裝使用、維護(hù)和清潔固相萃取儀時遵照下述指引。為確保您的安全及延長固相萃取儀的使用壽命， 保持固相萃取儀的使用質(zhì)量，請仔細(xì)閱讀下述安全注意事項。

1、向該裝置提供的真空壓力不應(yīng)大于0.1Mpa。

2、固相萃取柱與接頭應(yīng)安裝配合好，當(dāng)發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)總是達(dá)不到設(shè)定壓力時，請檢查各接頭是否擰緊，氣壓蓋密封墊是否平整。

3、玻璃器件在操作過程中請一定放置平當(dāng)。

4、系統(tǒng)配有12支流量閥開關(guān)，當(dāng)某一路不使用時，可將其關(guān)閉，以保證系統(tǒng)保持一定壓力。

5.電源線應(yīng)妥善設(shè)置，避免被人踩踏和物體擠壓。

6.交流電源插座和延展電線不可過荷，過荷會引發(fā)火災(zāi)或觸電事故。

7.請勿將任何異物通過通風(fēng)孔或開口塞入機(jī)內(nèi)，請勿將水或其它液體濺到機(jī)箱的控制面板上。

2018-07-31 14:21:22 3118次 http://www.yiqi.com/daogou/detail_631.html 熱門標(biāo)簽：
利用數(shù)控泵的技術(shù)，各小柱接頭可獨(dú)立提供相對恒定的負(fù)壓，讓各種溶液按標(biāo)準(zhǔn)分析程序要求的流速通過小柱，確保目標(biāo)分析物質(zhì)的高效萃取，最后將小柱轉(zhuǎn)換到洗脫架上，正壓勻速洗脫，避免交叉污染。

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