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細(xì)胞分析儀
細(xì)胞分析儀又叫流式細(xì)胞儀，是以流式細(xì)胞術(shù)為核心技術(shù)，集光學(xué)、電子學(xué)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、生物學(xué)、免疫學(xué)以及激光和計算機等多門學(xué)科和技術(shù)于一體的先進(jìn)科學(xué)技術(shù)設(shè)...[查看全部]
流式細(xì)胞儀是一類先進(jìn)的檢測儀器，其運用計算機技術(shù)，可以呈現(xiàn)即時的數(shù)據(jù)。流式細(xì)胞儀廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、藥理學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、病理學(xué)、臨床檢驗等領(lǐng)域。
流式細(xì)胞儀的發(fā)展歷史流式細(xì)胞儀最早的雛形誕生于1934年，Moldavan提出使懸浮的單個血紅細(xì)胞流過玻璃毛細(xì)管，在亮視野下用顯微鏡進(jìn)行計數(shù)，并用光電記錄裝置測量的設(shè)想。
1953年Crosland-Taylor根據(jù)牛頓流體在圓形管中流動規(guī)律設(shè)計了流動室。其后又經(jīng)過Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不斷改進(jìn)，設(shè)計了光電檢測設(shè)備和細(xì)胞分選裝置、完成了計算機與流式細(xì)胞儀的物理連接及多參數(shù)數(shù)據(jù)的記錄和分析、開創(chuàng)了細(xì)胞的免疫熒光染色及檢測技術(shù)、推廣流式細(xì)胞儀在臨床上的應(yīng)用。
近20年來，隨著流式細(xì)胞儀及其檢測技術(shù)的日臻完善，人們越來越致力于樣品制備、細(xì)胞標(biāo)記、軟件開發(fā)等方面的工作，以擴大流式細(xì)胞儀的應(yīng)用領(lǐng)域和使用效果。
流式細(xì)胞儀可以分成三個基本的結(jié)構(gòu)，這三個基本的結(jié)構(gòu)已經(jīng)形成了完善的系統(tǒng)，分別是光學(xué)檢測系統(tǒng)、液流系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。流式細(xì)胞儀借助了激光的原理，通過單克隆抗體和熒光染料的結(jié)合使用，并且結(jié)合了計算機技術(shù)，從而可以對單個細(xì)胞進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，通過發(fā)送參數(shù)信號的方式，確保檢測效率的提升，而且激發(fā)效率和單色性可以得到保障，在統(tǒng)計分析的過程中，各類數(shù)據(jù)都非常的精確，在檢測的過程中靈敏度和特異性都能得到保障。
1、液流系統(tǒng)
將經(jīng)特異性熒光染料染色的待測細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，加入流式細(xì)胞儀的樣品管中，在氣體壓力推動下進(jìn)入流動室，不含細(xì)胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出。
鞘液管入口方向與待測樣品流呈一定角度，這樣鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過
... 查看全文流式細(xì)胞儀是一種在功能水平上對單侖細(xì)施或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測儀器。流式細(xì)胞儀被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、生物學(xué)、微生物學(xué)、制藥學(xué)、生殖學(xué)等領(lǐng)域。
流式細(xì)胞儀的功能流式細(xì)胞儀是對高速直線流動的細(xì)胞或生物微粒進(jìn)行快速定量測定和分析的儀器，主要包括樣品的液流技術(shù)、細(xì)胞的計數(shù)和分選技術(shù)，計算機對數(shù)據(jù)的采集和分析技術(shù)等。
流式細(xì)胞儀以流式細(xì)胞術(shù)為理論基礎(chǔ)，是流體力學(xué)、激光技術(shù)、電子工程學(xué)、分子免疫學(xué)、細(xì)胞熒光化學(xué)和計算機等學(xué)科知識綜合運用的結(jié)晶。流式細(xì)胞術(shù)是一種自動分析和分選細(xì)胞或亞細(xì)胞的技術(shù)。
流式細(xì)胞儀的特點是：測量速度快、被測群體大、可進(jìn)行多參數(shù)測量，即對同一個細(xì)胞做有關(guān)物理、生物化學(xué)特性的多參數(shù)測量，且在統(tǒng)計學(xué)上有效。
流式細(xì)胞儀在使用前，甚至在使用過程中都要精心進(jìn)行調(diào)試，以保證工作的可靠性和最佳性。調(diào)試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區(qū)的光路等。
激光強度：除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外，還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為最大。
液流速度：可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督，調(diào)節(jié)氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。
測量區(qū)光路調(diào)節(jié)：這是調(diào)試工作的關(guān)鍵，需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90°散射測量光電系統(tǒng)垂直正交，而且交點較小。一般可在用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球等校準(zhǔn)中完成。
流式細(xì)胞儀中所測得的量是相對值，因此需要在使用前或使用中對系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)或標(biāo)定，這樣才能通過相對測量獲得絕對的意義。
流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)該穩(wěn)定，有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經(jīng)濟(jì)、容易獲得。常用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球作為非生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品，雞血紅細(xì)胞做為生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品。微球用樹脂材料制作，或標(biāo)有熒光素，或不標(biāo)記熒光素。
雞血紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)樣品制作過程昭下：取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑：雞血=1：4)，經(jīng)PBS清洗
... 查看全文流式細(xì)胞儀與其他細(xì)胞分析儀器相比，具有突出的技術(shù)特征，這些技術(shù)特征的不斷改進(jìn)就大致地代表了流式細(xì)胞儀的技術(shù)發(fā)展過程。
1、高速度:
分析速度以每秒可分析的細(xì)胞數(shù)來表示。流式細(xì)胞儀是以高速度的數(shù)據(jù)處理電子系統(tǒng)信號，配合高效的液流控制系統(tǒng)，有力地保證了流式細(xì)胞儀的檢測功能。
流式細(xì)胞儀對細(xì)胞的檢測速度一般為1000~5000個/s;而到目前為止，對細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)分析速度已達(dá)到了2×104個/s，最大分析速度可達(dá)到6×104個/s。
2、高靈敏度:
靈敏度的高低是衡量流式細(xì)胞儀檢測微弱熒光信號的重要指標(biāo)，一般是以能檢測到單個微球上最少標(biāo)記有異硫氫酸熒光素(FITC)或藻紅蛋白(PE)熒光分子數(shù)目來表示。
以前，每個細(xì)胞要帶有1000~3000個FITC分子才能在流式細(xì)胞儀上測量出來;目前，一個細(xì)胞上只要帶600個熒光分子，甚至帶100個FITC分子，即可以被檢測和分選出來。
3、高準(zhǔn)確度:
以前，在兩個細(xì)胞間待測細(xì)胞成分存在5%以上的差異時，流式細(xì)胞儀才能檢測出來;目前，兩個待測細(xì)胞間細(xì)胞成分僅相差1%左右時，流式細(xì)胞儀便可檢測出來。例如，在檢測男人和女人外周血淋巴細(xì)胞DNA含量時，僅僅是X染色體和Y染色體DNA含量之間有所區(qū)別(大約相差約占整個細(xì)胞的2%左右)，應(yīng)用流式細(xì)胞儀便可以輕而易舉地把男人和女人的淋巴細(xì)胞區(qū)分開并分選出來。
4、高精度:
分辨率是衡量流式細(xì)胞儀測量精確度的指標(biāo)，通常用變異系數(shù)(CV)值來表示。用流式細(xì)胞儀檢測某種細(xì)胞成分時，比用其他分析細(xì)胞學(xué)技術(shù)的CV值都要小得多，分辨率要高得多。眾所周知，用某種儀器分析細(xì)胞時，其CV值越大，分析結(jié)果越不精確。
以前的流式細(xì)胞儀，在分析細(xì)胞樣品時，CV值只能達(dá)到5%~7%左右，前向角散射光分辨率僅為0.3μm。流式細(xì)胞儀前向角散射光的分辨率已達(dá)到0.02μm。流式細(xì)胞儀的電信號脈沖通道，從當(dāng)初的12
... 查看全文流式細(xì)胞儀是一類常見的醫(yī)學(xué)檢測儀器，其可以對單一的細(xì)胞進(jìn)行多色的染色，而且還能對細(xì)胞表面進(jìn)行標(biāo)記，分析液體中的可溶性成分，分析細(xì)胞的大小顆粒。流式細(xì)胞儀操作簡單，測試的結(jié)果客觀而精確。
流式細(xì)胞儀在腫瘤學(xué)方面的應(yīng)用流式細(xì)胞儀可以進(jìn)行細(xì)胞周期分析，DNA倍體分析，定量分析檢測細(xì)胞增殖標(biāo)志物、細(xì)胞表面標(biāo)志、癌基因蛋白產(chǎn)物、耐藥蛋白、細(xì)胞凋亡等，從而獲得組織形態(tài)學(xué)方法難以得到的信息，可為腫瘤的臨床診斷、治療、預(yù)防和預(yù)后提供幫助。
DNA非整倍體的出現(xiàn)可能是發(fā)生早期癌變的一個重要指標(biāo)。淋巴瘤、白血病在病理形態(tài)學(xué)還不能進(jìn)行早期診斷之前，流式細(xì)胞儀可以提供確切的診斷信息。流式細(xì)胞儀對淋巴瘤的早期診斷比形態(tài)學(xué)檢查更為敏感、準(zhǔn)確。DNA非整倍體的交界瘤應(yīng)按惡性腫瘤對待，形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為良性的腫瘤出現(xiàn)非整倍體提示有惡性轉(zhuǎn)變的可能。
流式細(xì)胞儀主要是利用實體瘤標(biāo)本或穿刺標(biāo)本、胃鏡、食管鏡及支氣管鏡、腫瘤沖洗液、尿液等少量組織進(jìn)行DNA含量測定，進(jìn)行包括癌前病變及早期癌變的檢出，從而為臨床輔助診斷和進(jìn)一步治療如放療中的藥物選擇、強度、時間等提供較確切、可靠的信息。
1、白血病的診斷和治療
流式細(xì)胞儀采用各種抗血細(xì)胞表面分化抗原(CD)的單克隆抗體，借助于各種熒光染料(異硫氰基熒光素FITC，藻紅蛋白PE等)測定一個細(xì)胞的多種參數(shù)，以正確地判斷出該細(xì)胞的屬性。各種血細(xì)胞系統(tǒng)都具有其獨特的抗原，當(dāng)形態(tài)學(xué)檢查難以區(qū)別時，免疫表型參數(shù)對各種急性白血病的診斷和鑒別診斷有決定性作用。
流式細(xì)胞儀通過對人白細(xì)胞抗原(HLA)配型的測定，可以為異體干細(xì)胞移植病人選擇出最合適的供體。造血干細(xì)胞移植技術(shù)主要包括干細(xì)胞的鑒別、活性測定、干細(xì)胞動員和采集、分離純化、保存擴增、腫瘤細(xì)胞的凈化、干細(xì)胞回輸以及術(shù)后保持移植物抗宿主病的低發(fā)生率等一系列過程。
流式細(xì)胞儀測定CD34、
... 查看全文流式細(xì)胞儀是常用的細(xì)胞分析、分選的儀器，可以對處于液流中的各種熒光標(biāo)記的微粒進(jìn)行多參數(shù)、快速、準(zhǔn)確的定性、定量測定。
流式細(xì)胞儀選購方法1、明確目的
在購買流式細(xì)胞儀之前要考慮清楚自己的實驗?zāi)康模魇郊?xì)胞儀并不是萬能的，比如說如果想要檢測亞微分辨率的微粒，一般的流式細(xì)胞儀就都不合適。
就熒光檢測而言，經(jīng)濟(jì)實惠的新型流式細(xì)胞儀在分辨模糊昏暗的細(xì)胞群體方面，不如那些貴一點的流式細(xì)胞儀，假如需要研究分析磷酸化受體和未磷酸化受體的話，可能就要重新考慮流式細(xì)胞儀的選擇了。
2、實際情況
要考慮清楚，需要分析多少樣品，進(jìn)行怎樣的實驗?預(yù)期的參數(shù)是多少?在未來的實驗中研究需求的數(shù)量和復(fù)雜性是否會增加?是否有可能升級到你想要的流式細(xì)胞儀?如果流式細(xì)胞儀不能滿足未來實驗的要求，也許應(yīng)該選擇在中心實驗室中進(jìn)行實驗。
3、費用總計
進(jìn)行流式細(xì)胞實驗所需要的花費并不僅僅是指花在試劑盒，過濾器，其它耗材上的錢，還有零件的更換，以及安裝這些零件花費的時間。一臺流式細(xì)胞儀細(xì)心維護(hù)，半年也需要400美元，一些傳統(tǒng)的流式細(xì)胞儀更是要花費上千。
4、儀器檢測
如果已經(jīng)下決心購買流式細(xì)胞儀了，那么可以聯(lián)系中心實驗室，詢問是否有這種流式細(xì)胞儀的演示實驗，一些中心實驗室都會召集一些研究人員在樣板機器中進(jìn)行常見的實驗操作，并分析這些結(jié)果與其它流式細(xì)胞儀結(jié)果的區(qū)別。如果不能到中心實驗室中檢測，那么可以在實驗室中自己檢測，注意流式細(xì)胞儀的使用和維護(hù)情況。
5、自我培訓(xùn)
流式細(xì)胞儀一般都有軟件，但是這并不是說在實驗過程中，就不會把熒光背景當(dāng)作一個假陽性信號，因此研究人員還是需要花些時間進(jìn)行流式細(xì)胞分析培訓(xùn)的。
流式細(xì)胞儀的配置選購如何從眾多的流式細(xì)胞儀中挑選出最適合自己的機型，應(yīng)當(dāng)從實際應(yīng)用出發(fā)分析，分析自己的需求，決定什么樣的流式細(xì)胞儀最具性價比、最適合自己。
1、DNA倍體分析
流式細(xì)胞
... 查看全文細(xì)胞分析儀又叫流式細(xì)胞儀，是以流式細(xì)胞術(shù)為核心技術(shù)，集光學(xué)、電子學(xué)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、生物學(xué)、免疫學(xué)以及激光和計算機等多門學(xué)科和技術(shù)于一體的先進(jìn)科學(xué)技術(shù)設(shè)備。
細(xì)胞分析儀的原理細(xì)胞分析儀主要用作細(xì)胞分析和細(xì)胞分選。
細(xì)胞分析原理：
將待測樣品制成單細(xì)胞懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色后裝入樣品管，由系統(tǒng)產(chǎn)生一定氣體壓力將樣品管送入流動室，細(xì)胞懸液從樣品管射出，樣品管周圍由鞘液包圍。
鞘液管與樣品管成一定角度使得待測細(xì)胞在鞘液的作用下成單行排列，形成細(xì)胞柱，通過噴嘴與入射的激光束垂直相交，細(xì)胞或顆粒被激光激發(fā)產(chǎn)生熒光信號和非熒光散射信號，最終通過光學(xué)系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)處理后由計算機輸出。
由于各細(xì)胞或顆粒的大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、蛋白質(zhì)含量、核酸(DNA或RNA)含量等的不同，使得接收到的熒光信號和非熒光散射信號也不同，從而實現(xiàn)對不同性質(zhì)的細(xì)胞或群體進(jìn)行分析和分類。
細(xì)胞分選原理：
細(xì)胞分析儀的分選功能是由細(xì)胞分選器來完成的。在分選過程中，細(xì)胞分析儀通過高頻振蕩對液流施加液滴驅(qū)動能量，使其斷離為均勻的液滴，根據(jù)事先確定的分選標(biāo)準(zhǔn)由系統(tǒng)判斷是否將被分選，由充電電路對選定的細(xì)胞液滴進(jìn)行充電。
當(dāng)帶電液滴通過電場時，會在電場的作用下向左或向右偏轉(zhuǎn)，具體方向取決于液滴的電荷極性，未帶電荷的液滴不受電場的影響，它們將在中心位置通過，最后進(jìn)入廢液抽吸器，發(fā)生偏轉(zhuǎn)的液滴落入相應(yīng)的收集器中，從而實現(xiàn)細(xì)胞分選。
一般來說，在進(jìn)行較大或者脆弱細(xì)胞的分選時，為了得到最佳結(jié)果，應(yīng)該使用較大的噴嘴和較低的壓力;在分選較小或者非脆弱細(xì)胞時，如果要增加產(chǎn)量，應(yīng)該使用較小的噴嘴和較高的壓力。
細(xì)胞分析儀的特點細(xì)胞分析儀可以對不同的單細(xì)胞懸液進(jìn)行檢測，而且在確保細(xì)胞數(shù)量足夠的前提下，可以在短時間內(nèi)獲取大量的細(xì)胞，可以同時檢測數(shù)百萬的細(xì)胞。
細(xì)胞分析儀可以對單個細(xì)胞的多種特征進(jìn)行分析，對單個
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