DNA實(shí)驗(yàn)室常用的DNA提取方法有Chelex100法、有機(jī)法、磁珠法、鹽析法、NaOH法等，本文詳細(xì)介紹這些方法。

(一)Chelex100法 

原理：Chelex100是一種螯合樹脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成，含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子，起著螯合基團(tuán)作用，對多價(jià)金屬離子有極強(qiáng)親和力。在低離子強(qiáng)度、堿性及100℃煮沸條件下，可以使細(xì)胞膜裂解，并使與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)變性，DNA游離。檢材基質(zhì)中一般含有大量金屬離子，在低離子強(qiáng)度及加熱條件下，金屬離子可以輔助脫氧核糖核酸酶降解DNA，也可以抑制PCR反應(yīng)，所以在提取DNA時(shí)，加入Chelex100，螯合了金屬離子，防止了DNA降解，提高了PCR擴(kuò)增成功率。

方法：剪取適量血斑、精斑、汗斑、鼻涕斑、指甲、毛根、軟組織等等生物檢材，置于0.5ml離心管內(nèi)，加入適量純水，室溫浸泡，13,000rpm離心5min，上清丟棄，管底留約20μl左右液體及檢材基質(zhì)，加入100-200μl 5%Chelex100(有時(shí)需加適量PK)56℃15min至數(shù)10小時(shí)不等，100℃8min，13,000rpm離心5mim，上清備用。

(二)有機(jī)法 

原理：有機(jī)法提取DNA一般是指用平衡酚(又叫飽和酚)、氯仿等按不同比例混合，采用不同方法提取DNA。DNA易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑，蛋白質(zhì)分子表面帶有親水性基因，很容易進(jìn)行水合作用，并在表面形成一層水化層，使蛋白質(zhì)分子能夠順利地進(jìn)入到水溶液中，形成穩(wěn)定的膠體溶液。在有機(jī)溶劑存在的情況下，破壞了蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性，使蛋白質(zhì)變性沉淀，離心后，有機(jī)溶劑于試管底層(有機(jī)相)，DNA繼續(xù)穩(wěn)定的存在于上層水相，蛋白質(zhì)沉淀存在于兩相之間。水相中的DNA在大量冷無水乙醇及單價(jià)陽離子存在的情況下，水會溶于乙醇中，而DNA從水相中析出，沉淀，通過離心回收。

方法：剪取適量檢材，置于0.5ml離心管內(nèi)，清洗方法同用Chelex100法提取DNA，加入適量純水及終濃度為100μg/ml PK，37℃-56℃孵育15min至數(shù)10小時(shí)，有時(shí)間隔一段時(shí)間補(bǔ)加適量PK → 13,000rpm 5min → 吸上清于另一管 → 加入等體積平衡酚 → 振蕩或顛倒徹底混勻 → 13,000rpm 5min →吸上清水相于另一管，加入等體積1：1混合平衡酚：氯仿 → 振蕩或顛倒徹底混勻 → 13,000rpm 5min → 吸上清水相于另一管 →加入等體積氯仿 → 振蕩或顛倒徹底混勻 → 13,000rpm 5min → 吸上清水相于另一管 →加入2.5倍體積冷無水乙醇冷凍保存10min以上 → 13,000rpm 5-10min → 棄上清 → 室溫涼干或100℃ 5min烤干 → 加入10-20μl純水 → 室溫溶解或100℃5min幫助溶解 → 離心上清備用

(三)磁珠法 

原理：(異)硫氰酸胍(GuSCN)是強(qiáng)烈蛋白變性劑，不破壞蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)，能破壞細(xì)胞膜及核膜蛋白，并使核酸酶失活，釋放DNA。磁珠可以特異性吸附DNA，與DNA結(jié)構(gòu)及片段大小無關(guān)。通過洗滌液洗滌，在僅留有特異吸附DNA的磁珠中加入洗脫液，65℃解離后，DNA釋放于洗脫液中。 

方法：5%Chelex100提取DNA上清液或者用裂解液直接提取骨骼、指甲、毛發(fā)DNA上清液等約移于0.5ml離心管內(nèi) → 加入結(jié)合液100ul，磁珠5ul  → 振蕩混勻，室溫5min → 在磁架上吸棄上清 → 加入洗滌液I 300ul → 振蕩混勻 → 在磁架上吸棄上清 → 加入洗滌液II 300ul→ 振蕩混勻 → 在磁架上吸棄上清 → 加入洗滌液II 300ul → 室溫放置2 min干燥 → 加入30-50μl 洗脫液，振蕩混勻 → 65℃ 10min → 速于磁架上吸上清于另一新離心管內(nèi)，備用。

(四)鹽析法 

1988年Miller等報(bào)導(dǎo)經(jīng)典鹽析法提取血液DNA，其方法為溶解紅細(xì)胞后，離心沉渣用PK消化，用大約6M飽和NaCl沉淀蛋白質(zhì)，離心上清中DNA用無水乙醇沉淀，用TE溶解。

(五)NaOH法

原理：強(qiáng)堿溶解、變性蛋白質(zhì)，破壞細(xì)胞膜及核膜，變性核酸酶，釋放DNA，NaOH不破壞DNA一級結(jié)構(gòu)。

方法： 

1、試劑配制 裂解buffer  0.2M NaOH 中和buffer   0.04M Tris-HCL pH7.5  2、實(shí)驗(yàn)步驟 5μl或1×1mm血斑 → 加入450μl純水 → 室溫或37℃15-30min → 13,000rpm 5min → 棄上清 → 沉淀中加入20μl 0.2M NaOH（全血室溫5min血斑75℃5min） → 加入180μl 0.04M Tris-HCL pH7.5 → 振蕩混勻，離心上清備用。