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蛋白質(zhì)印跡法電泳

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-08-31  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):196
核心提示:蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗)就是Western Blot。作為一種實驗方法。它常被用于分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中。生物組織樣品或者凝膠電泳處理過的細胞經(jīng)過特異性抗體著色,通過對著色的位置和著色深度的分析來使特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息獲得。電泳電泳時間通常為4-5個小時,40V電壓比較好,60V也能夠使用。當電泳至溴酚蘭剛跑出,就能夠使電泳終止,然后轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜1、需要1張7.3~8.6cm的NC膜或PVDF膜和6張7.0~8.3cm的濾紙用作轉(zhuǎn)一張膜的準備。由于膜會受到手上的蛋白

蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗)就是Western Blot。作為一種實驗方法。它常被用于分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中。生物組織樣品或者凝膠電泳處理過的細胞經(jīng)過特異性抗體著色,通過對著色的位置和著色深度的分析來使特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息獲得。


電泳

電泳時間通常為4-5個小時,40V電壓比較好,60V也能夠使用。當電泳至溴酚蘭剛跑出,就能夠使電泳終止,然后轉(zhuǎn)膜。


4.jpg

轉(zhuǎn)膜

1、需要1張7.3~8.6cm的NC膜或PVDF膜和6張7.0~8.3cm的濾紙用作轉(zhuǎn)一張膜的準備。由于膜會受到手上的蛋白的污染,所以一定要戴手套切濾紙和膜。將切好的NC膜或PVDF膜放在水上浸兩個小時才能夠使用。用鑷子往有超純水的平皿里放置膜,要使膜在水上漂浮。與水接觸的是膜的下層。整個膜會在毛細管作用下浸濕,如果膜浸沒在水中,就會有一層空氣膜在膜與水之間形成,如此就會對膜吸水起到阻撓作用。將濾紙、浸過的膜、一支玻棒、兩塊海綿墊、以及轉(zhuǎn)膜用的夾子放入到了加有轉(zhuǎn)移液的搪瓷盤里。


2.打開夾子,保持黑的一面水平,將一張海綿墊墊在上面,為了將里面的氣泡搟走,需要用玻棒來回搟幾遍。將三層濾紙墊在墊子,一手將濾紙固定,一手用玻棒將其中的氣泡搟去。


3、需要先撬掉玻璃板才能夠剝膠,要輕輕的反復(fù)撬兩個邊。將小玻璃板除去后,輕輕刮去濃縮膠,要防止刮破分離膠。在濾紙上要將分離膠蓋小心剝下,為了使其與濾紙對齊,用手調(diào)整,輕輕用玻棒將氣泡搟去。在膠上蓋上膜,需要將氣泡去除并且將整個膠蓋滿。將3張濾紙蓋在膜上并且將氣泡除去,zui后將另一個海綿墊蓋上。搟幾下就能夠?qū)A子合起。在轉(zhuǎn)移液中進行整個操作,要不斷的將氣泡搟去。由于膜兩邊的濾紙接觸后會發(fā)生短路,因此它們不能相互接觸。


4.在轉(zhuǎn)移槽中放入夾子,要使夾的白面對槽的紅面,夾的黑面對槽的黑面,電轉(zhuǎn)移時會有熱產(chǎn)生,為了對槽降溫,可以在冰水混合物中埋入轉(zhuǎn)移槽,或者將一塊冰放在槽的一邊。通常使用40V轉(zhuǎn)移3小時或60V轉(zhuǎn)移2小時,或者80V轉(zhuǎn)移1小時。


5.轉(zhuǎn)完后用1×麗春紅染液對膜染色5分鐘。然后將沒染上的染液用水沖洗掉,膜上的蛋白就能夠看到,晾干膜備用。


2019-08-29 17:49:56 25次 http://www.yiqi.com/daogou/detail_3861.html 熱門標簽: 蛋白質(zhì)印跡法指示劑介紹蛋白質(zhì)印跡法含量測定
 
關(guān)鍵詞: 濾紙 氣泡 電泳 轉(zhuǎn)移 印跡
 
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