血小板是從骨髓成熟的巨核細胞胞漿解脫落下來的小塊胞質(zhì)，雖然僅占骨髓有核細胞總數(shù)的0.05% ，但是它在血管損傷后的止血過程中起著重要作用。除了自然止血外，它還影響著血管中血栓的形成，進而形成血栓性疾病，如心梗和缺血性中風等。
 

正常生理條件下，未受傷的血管系統(tǒng)中血小板不發(fā)生粘附、活化和聚集。血小板活化在血栓形成中起重要作用，活化可分為初級活化和進一步活化。進一步活化中有很多活性物質(zhì)如膠原、二磷酸腺苷(ADP)等都可以與血小板膜上相關(guān)受體結(jié)合，進行進一步激活，如大家熟知的GPCRs受體。血小板胞質(zhì)溶膠內(nèi)游離鈣離子濃度的變化在血小板進一步激活中扮演至關(guān)重要的角色，當其鈣離子升高會促進血小板活化，反之亦然。
 

鈣離子作為細胞內(nèi)重要的第二信使，參與了多數(shù)生物活動過程。血小板活化過程中伴隨著細胞內(nèi)鈣離子的跨膜內(nèi)流和血小板鈣庫的鈣離子釋放，鈣離子濃度升高后，血小板鈣庫的質(zhì)膜上的鈣離子ATP酶將鈣離子重新轉(zhuǎn)運回到鈣庫之中。鈣離子流的變化是基于毫秒級別，不通過特殊、有效的檢測手段很難在較短時間內(nèi)獲得大量、準確的實驗結(jié)果。
 

目前較為主流的細胞內(nèi)鈣離子檢測手段是熒光探針標記法，如 Flou-4 、Indo-1 、Fura-2等。在眾多熒光探針種類中，F(xiàn)ura-2熒光探針以其自身優(yōu)勢深受大家喜愛，可直接用于微孔板讀板機系統(tǒng)或成像系統(tǒng)對其進行觀察。傳統(tǒng) Fura-2 熒光探針需要每個步驟進行清洗，相對比較繁瑣。Molecular Devices 出品的 Fura-2 QBT 具有專利的防止信號屏蔽的作用，F(xiàn)lexStation 3 是MD推出的一款內(nèi)置多通道自動移液裝置，具有的Flex模式可以在短時間（毫秒級）獲得有效信號強度， 兩者結(jié)合能讓您單位時間內(nèi)獲得準確、可靠的結(jié)果。

本次我們將介紹 Fura-2 QBT鈣流試劑盒在FlexStation 3 微孔板檢測平臺如何進行實驗操作和軟件設置，獲得相應結(jié)果后如何分析。我們提供了可重復、可量化操作的解決方案，適合于高通量血小板細胞鈣離子檢測的方式，可用于激動劑EC50和拮抗劑IC50檢測和篩選工作。