支 原 體 污 染
細(xì)胞污染可分為細(xì)菌、霉菌、酵母菌、支原體污染，其中支原體污染發(fā)生的概率 50%。支原體(Mycoplasma) 是最小的原核生物，約0.1-0.3 m，可穿透0.22-0.45 m 過濾膜 （BI血清經(jīng)過3次0.1 m濾膜并且檢測支原體)。
支原體污染棘手的原因之一是沒有如其他污染源 立即可辨 的現(xiàn)象，支原體污染侵襲細(xì)胞但是并不一定致死。如果您的細(xì)胞出現(xiàn)如下狀態(tài)：增殖變慢、形態(tài)變差、培養(yǎng)液變黃但是沒有渾濁，說明您的細(xì)胞可能正遭受支原體的摧殘?。?/p>

受支原體污染的293T             正常無污染的293T
  支 原 體 檢 測
怎么知道您的細(xì)胞正遭受支原體摧殘呢，常見的檢測方法幾種：
1.分離培養(yǎng)法
將可疑樣本接種到支原體培養(yǎng)基中，觀察菌落生成。缺點(diǎn):培養(yǎng)時(shí)間長，須3~5周才能判斷。
2.DNA熒光染色法
利用熒光染劑 (Bisbenzimide, Hoechst 33258) 檢測支原體污染，但若有些細(xì)胞易有熒光背景，可能會(huì)干擾結(jié)果判讀。
3.PCR法
利用特異性引物，經(jīng)PCR反應(yīng)檢測支原體DNA，靈敏且快速。
BI EZ-PCR支原體檢測試劑盒：采用PCR法，簡化了細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測過程，可檢測出細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見的支原體污染。
試劑盒中包含獨(dú)特的反應(yīng)混合液，以及PCR中需要的所有試劑。使用者只需備有樣品，最后產(chǎn)物跑完膠后，如有一個(gè)270bp的片段，則代表有支原體污染，整個(gè)檢測過程耗時(shí)約4小時(shí)。

  支 原 體 污 染 處 理 細(xì)胞培養(yǎng)常見的支原體污染為6種： 發(fā)酵支原體(M.fermentans)，唾液支原體(M.salivarum)，口腔支原體(M.orale)，精氨酸支原體(M.arginini)，豬鼻支原體(M.hyorhinis)，萊氏無膽甾原體(A.laidlawii)等，有些是動(dòng)物來源，有些是人來源，支原體沒有細(xì)胞壁，所以使用青霉素等破壞細(xì)胞壁類藥物不具效用，建議使用專為支原體開發(fā)的處理試劑保護(hù)您珍貴的細(xì)胞。 支原體污染處理試劑： BIOMYC-1 Antibiotic Solution 100X，貨號(hào)：03-036-1B/C/D。
BIOMYC-2 Antibiotic Solution 100X，貨號(hào)：03-037-1B/C/D。
BIOMYC-1 需BIOMYC-2按先后聯(lián)合使用。                                 
BIOMYC-3 Antibiotic Solution 100X，貨號(hào)：03-038-1B/C/D。

上述處理試劑可去除90%以上實(shí)驗(yàn)室常見的支原體污染 (支原體非單一物種，無單一試劑能100%去除支原體污染)，不具細(xì)胞毒性，方法非常便捷。
 

支 原 體 污 染 預(yù) 防
俗話說，預(yù)防勝于治療，所以操作的器材與環(huán)境消毒也至關(guān)重要：
1.超凈工作臺(tái)預(yù)防
BI也提供Pharmacidal (貨號(hào): IC-110100)作為相應(yīng)的處理試劑，Pharmacidal可有效預(yù)防真菌（和孢子），細(xì)菌（和孢子），支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長和污染。Pharmacidal成分為四苯甲基化合物，可生物降解，無毒，無刺激，對(duì)一般的工作臺(tái)和器材表面沒有任何損傷。不需稀釋，每次使用超凈工作臺(tái)前或每天噴灑一次臺(tái)面，二氧化碳培養(yǎng)箱每兩周一次噴灑消毒，噴灑后讓其自然風(fēng)干，無需擦拭。

 

2.水盤為維持培養(yǎng)箱濕度所必需，但也成為潛在的污染源
BI的 Aquaguard-1 (貨號(hào): 01-867-1B 100ml, 稀釋100倍使用) 消毒水盤效果非常好，而且不會(huì)腐蝕不銹鋼，無毒，不揮發(fā)。
3.其他實(shí)驗(yàn)室的水浴環(huán)境也容易造成污染
BI的Aquaguard-2 (貨號(hào): 01-916-1E 50ml, 稀釋500倍使用)，可以有效消毒任何形式的水浴環(huán)境。

 

Anyway，
科研路漫漫，
支原體君常相伴，
還是要做好預(yù)防和及時(shí)地檢測，
給細(xì)胞安全的成長環(huán)境

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