應(yīng)用電子顯微鏡高分辨率的觀察有機細胞壁

  在觀察過程中遇到的問題及假象
  使用掃描電鏡，通常難以區(qū)分小范圍的形態(tài)特征和非有機質(zhì)及粘附在
有機結(jié)構(gòu)上的物體。潛在的無機物的假象可能包括殘留在揭片上的礦物質(zhì)
，以及酸蝕刻時沉積的粉末狀方解石。使用透射電鏡，在高倍鏡下對細胞
壁小碎片的確認和定位是一個難題。標(biāo)準蝕刻或深度蝕刻將會導(dǎo)致困難進
一步加大，主要是由于細胞壁疏松并很容易破碎，或起泡而毀壞。此外，
在揭片中，礦物質(zhì)會弄鈍刀口，這樣有礙超薄切片。
  詳細的高分辨率的觀察對標(biāo)準揭片技術(shù)提出了許多問題。實施的實驗
方案進入了一種兩難的境地。通常，我們想盡可能從有機細胞壁上除去礦
物質(zhì)，但是用酸進一步處理又會毀壞細胞壁。正在消失的揭片技術(shù)提供了
：(”一種對細胞壁損害最小的蝕刻標(biāo)本的方法；(2)用一種溶劑支持蝕刻
的細胞壁，去掉所有的醋酸膜，并一起去掉牢固的礦物質(zhì)和粉

  高倍下撕片技術(shù)運用中出現(xiàn)的問題
  第一個問題是，酸蝕刻時的起泡可能導(dǎo)致細胞壁的嚴重損害。對于平
行于巖石表面的細胞壁(典型縱向切片)和像薄壁組織和木質(zhì)部等組織中較
薄的細胞壁，這種損害尤其嚴重。用標(biāo)準的7％—6％蝕刻強度的酸會導(dǎo)致
重大損壞。此外，細胞壁碎片會疏松，在高倍光學(xué)顯微鏡下造成假象。這
對解釋像孔和壁層加厚這樣細微尺度的結(jié)構(gòu)是一個大問題。第二個問題是
，有機壁物質(zhì)可能會隨礦物層而間接地固定到醋酸膜上。隨后的揭片脫礦
作用將去掉許多的有機物質(zhì)，特別是在縱向壁上。第三個問題是，與蝕刻(
厚300—500μm)過程中粉末狀的殘余物(對碳酸鹽煤核的方解石)有關(guān)。這
些可以通過脫礦作用部分去除，但是，由于這些殘留物會深深地滲入到醋
酸膜中，仍會殘留一定數(shù)量

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