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骨頭或者牙齒怎樣制作用于顯微鏡觀察的切片

骨頭 牙齒染色法
 
  骨頭 牙齒為動(dòng)物體內(nèi)最堅(jiān)硬之組織，欲制成切片有二種方法，其
回染色法一為利用脫鈣液  溶解其堅(jiān)硬之鈣質(zhì)使組織軟化，即可制作切片。
  另法用鋸子將組織鋸成0.2 ~ 0.3㎝厚度，再用磨石磨成100μ~ 150
  μ之厚度后加以染色及封蓋。 
 
第一法：切片法 
  使用脫鈣完畢之組織材料，移入內(nèi)中和一天，經(jīng)流水洗之，
  后依脫水法，包埋法，制作8μ~ 15μ左右之切片。用染色法，
  染色程序依染色法，其他采用及均可。 
 
第二法：手工研磨法 
  骨頭 牙齒于流水中洗凈，放進(jìn)Acetone內(nèi)脫取脂肪約一星
  期后以流水洗一天，續(xù)于20 %漂白劑中漂白一星期，用流水
  洗一天，于日光下曬干。用鋸子將組織鋸成0.2 ~ 0.3㎝厚度，
  用手指壓住于磨石上推磨成100μ~ 150μ之厚度，再以細(xì)磨石
  加Glycerin磨至表面光滑，于流水中洗，再經(jīng)95 % Alcohol浸透
  一天，放于室內(nèi)干燥后以Balsam封蓋之。 
 
第三法：薄片封蓋法 
  以手工推磨而成之薄片的封蓋，是Balsam只黏貼于薄片周圍
  而不滲透于薄片組織內(nèi)，因Balsam如滲透入組織細(xì)胞內(nèi)，組
  織細(xì)胞之輪廓被透明化無(wú)法觀察，是故，Balsam須以酒精燈
  煮沸濃縮，但切忌過(guò)渡免生氣泡，將剛煮沸過(guò)之Balsam滴于
  組織上，Cover Glass封蓋后用手輕壓，隨即放入冷水內(nèi)使其迅
  速凝固，Cover Glass須以圓形為主，后Cover Glass周圍以未稀
  釋之油漆加以封之。 
  諸須先以Trichloressigsaure 10 % 之Formalin 10 %混合液脫鈣處
  理，后以一般正常切片法包埋制作。H-E 染色即可。
  可觀察細(xì)胞形狀、骨小板、股板層、Horris管、 Volkman管、
  骨小洞、骨小管等。 
 
第四法：手工磨成薄片染色法 
  (1)?薄片放進(jìn)1 % NaOH 24 ~ 48 hrs.，薄片放置時(shí)勿重疊。
  (2)?Distilled Water洗10 mins.。 
  (3)?1 % AgNO3 24 hrs.。 
  (4)?Distilled Water洗10 mins.。 
  (5)?中性1 % Formalin還原24 hrs.，此時(shí)薄片成黑色。
  (6)?黑色薄片以流水洗30 mins.。 
  (7)?于室內(nèi)或38℃恒溫箱內(nèi)干燥之。 
  (8)?用細(xì)磨石加輕磨薄片兩面使黑色成淡黑色。
  (9)?移入流水洗1 hr.，經(jīng)95 % ~100 % Alcohol脫水。
  (10)?用Xylene透明，濃縮之Balsam封蓋。 
  染色結(jié)果  骨小洞、骨小管與其他組織均呈鮮明黑色。
  如欲觀察Harris管以煮之染色可得極鮮艷之染色效果。