【干貨分享】昊諾斯第九期“組織研磨和樣品處理分享、討論”

這一期我們?yōu)榇蠹姨峁┑陌咐恰笆衿ぱ心ヌ崛NA”：

實(shí)驗(yàn)：石榴皮研磨提取RNA

實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：武漢某生物公司

試驗(yàn)樣品：石榴皮樣品

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1、將石榴皮剪成小碎塊凍存，實(shí)驗(yàn)時(shí)取出放入圓底離心管，單管放入體積不超過(guò)離心管體積的1/3；

2、在離心管中加入硬質(zhì)不銹鋼研磨珠，蓋好管蓋，與適配器一起放入液氮然后取出；

3、將取出后的適配器安裝在TL2010S中通量組織研磨儀上，參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨一定時(shí)間。

在昊諾斯銷(xiāo)售工程師對(duì)以上案例簡(jiǎn)單講解之后，用戶們?cè)凇瓣恢Z斯鼎昊源組織研磨分享”群內(nèi)進(jìn)行了熱烈的分享、討論：

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用戶：石榴皮含有果膠吧？

?昊諾斯：應(yīng)該含有少量果膠，其實(shí)石榴皮也算是植物樣品中的一類(lèi)。

用戶：果膠纖維素的存在對(duì)檢測(cè)過(guò)程有影響嗎？

??昊諾斯：研磨的方法與研磨葉片相同。

用戶：我看看。

??昊諾斯：應(yīng)該不會(huì)有影響，現(xiàn)在的RNA提取試劑還是挺成熟的。

用戶：時(shí)間不一樣吧。

??昊諾斯：您是說(shuō)研磨時(shí)間？

用戶：嗯，知道了，還有提取試劑存在。

??昊諾斯：石榴皮凍過(guò)液氮以后還是很好研磨的。

用戶：前面的負(fù)八十有必要嗎？后面直接液氮了？

??昊諾斯：前面的-80是保存樣品。

用戶：前面的負(fù)八十有必要嗎？后面直接液氮了？我也有同樣的疑問(wèn)。

用戶：負(fù)八十是為了降低空氣體積吧，免得液氮時(shí)爆開(kāi)。

??昊諾斯：這個(gè)使用的客戶也是服務(wù)公司，樣品都是別的客戶提供的。

??昊諾斯：也有這方面的原因。

用戶：液氮的溫度是多少度？

用戶：我想問(wèn)管和鋼珠需要depc水處理嗎？

??昊諾斯：負(fù)一百九十多。

用戶：這個(gè)是必須的吧，196。

??昊諾斯：如果提取的是RNA，是必須處理的。

用戶：那我想問(wèn)問(wèn)有沒(méi)有替代離心管的適配器？我一用就裂管。

用戶：換管子材料吧，能禁得起冷凍的。

用戶：你們用哪一種牌子的？

??昊諾斯：我們的經(jīng)驗(yàn)是選用圓底2ml離心管，減少液氮冷凍時(shí)間，縮短組織研磨儀研磨時(shí)間，或者換個(gè)牌子的離心管。

用戶：我都試過(guò)了，就在組織研磨儀研磨后發(fā)現(xiàn)裂了，所以想問(wèn)問(wèn)你們用什么牌子。

??昊諾斯：哪位老師用的管效果還可以，可以介紹一下。

用戶：我們用的一直都不錯(cuò)，也出現(xiàn)過(guò)裂管。

??昊諾斯：據(jù)用戶說(shuō)這款的不錯(cuò)。

昊諾斯：還有eppendorf的。

用戶：進(jìn)口的？無(wú)須滅酶了？

用戶：然后就調(diào)低組織研磨儀轉(zhuǎn)速1000吧，延長(zhǎng)打樣時(shí)間。

??昊諾斯：進(jìn)口的，第一個(gè)是Thermo的。

用戶：其實(shí)我個(gè)人覺(jué)得RNA也沒(méi)有想象的那么恐怖。

用戶：哦哦，謝啦。

用戶：三無(wú)的管子。

用戶：裂管是因?yàn)闇夭钭兓竺矗?p>用戶：就是不清楚。

用戶：有個(gè)疑問(wèn)啊，DNA和RNA能實(shí)現(xiàn)分離嗎？

用戶：鋼珠用酒精泡泡，提的RNA就OK。

用戶：組織研磨儀能否控溫？

??昊諾斯：現(xiàn)在好像有種提取液可以實(shí)現(xiàn)。

用戶：管子裂是因?yàn)橐旱滤芰献兊么嗔?，然后高速鋼珠一沖撞就裂了。

用戶：為什么要分離呢？樣品很珍貴？

用戶：您的意思是先提取DNA，然后繼續(xù)利用提取完的原材料來(lái)提取RNA？

用戶：塑料材質(zhì)達(dá)不到低溫保護(hù)。

用戶：提完分別用對(duì)應(yīng)的酶處理這樣技能保證量也能保證質(zhì)。

用戶：不是，我的意思是兩者有沒(méi)有分離干擾？

用戶：用trizol說(shuō)明書(shū)上說(shuō)是可以DNA和RNA分離。

??昊諾斯：應(yīng)該是沒(méi)有，之前我問(wèn)過(guò)一個(gè)客戶，用組織研磨儀研磨一次，用特定的提取液，可以同時(shí)提取DNA和RNA。

用戶：同一樣品可以同時(shí)提取。

用戶：提?RNA不如DNa省事。

用戶：我們打樣裂過(guò)后采取的措施第一減低組織研磨儀轉(zhuǎn)速，打樣后然后再凍再打，延長(zhǎng)打樣時(shí)間；二把樣品分裝兩管打樣后加上TRIZON再合并。

用戶：嗯，看來(lái)提取劑的選擇性已經(jīng)非常高了。

??昊諾斯：您可以先降低下組織研磨儀研磨速度，比如1900轉(zhuǎn)或者1800轉(zhuǎn)，試下。

用戶：我用的是1700。

用戶：速度關(guān)系不大，是溫度導(dǎo)致的。

用戶：那如何是好？

用戶：只能換管子材料。

??昊諾斯：嗯嗯，就像呂老師說(shuō)的，可以研磨比如30s，取出后再凍液氮，然后再磨，少量多次。

用戶：國(guó)外進(jìn)口的不知道現(xiàn)在怎樣，之前也碎過(guò)好幾個(gè)，把老板心疼壞了。

??昊諾斯：進(jìn)口的應(yīng)該效果會(huì)好一點(diǎn)，畢竟國(guó)內(nèi)的良莠不齊。

用戶：當(dāng)時(shí)還不是研磨，只是離心。

用戶：有個(gè)疑問(wèn)：離心管有金屬材料的么？

用戶：感覺(jué)應(yīng)該有，但沒(méi)見(jiàn)過(guò)。

??昊諾斯：我們有5ml不銹鋼的研磨管。

用戶：容積大的我們也有，但是1.5的沒(méi)見(jiàn)過(guò)。

用戶：304材質(zhì)的可以，耐低溫和高溫。

用戶：不銹鋼的成本太高吧，會(huì)不會(huì)引進(jìn)交叉污染？

用戶：但是不銹鋼的可以重復(fù)使用呀，滅菌即可。

??昊諾斯：清洗消毒干凈，應(yīng)該不會(huì)交叉污染。

用戶：304的很耐操的。

昊諾斯：304很耐腐蝕。

??昊諾斯：蓋是什么材質(zhì)的？

用戶：標(biāo)配是聚乙烯，可選配硅橡膠。

用戶：應(yīng)該挺成熟了。

用戶：現(xiàn)在可以適配上這個(gè)機(jī)器嗎？

??昊諾斯：看介紹和2ml離心管的尺寸一樣，應(yīng)該可以。

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