近日廣東省食藥監(jiān)抽檢網(wǎng)購(gòu)面膜發(fā)現(xiàn)，超過20%的面膜中非法添加了糖皮質(zhì)激素，這種被稱為“皮膚鴉片”的物質(zhì)是一類甾體激素，依據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中提到這類物質(zhì)是嚴(yán)禁違法濫用添加于化妝品，若將其作為細(xì)嫩美白肌膚的功效成分，其會(huì)破壞人體激素平衡，如果長(zhǎng)期使用，人體皮膚會(huì)產(chǎn)生激素依賴癥狀，停用后反而會(huì)加重皮膚過敏，出現(xiàn)紅斑、丘疹、毛細(xì)血管擴(kuò)張等嚴(yán)重問題，激素依賴性皮炎發(fā)病只需要大約兩周時(shí)間，但是治療起來(lái)卻是一個(gè)漫長(zhǎng)而棘手的過程。

?作為實(shí)驗(yàn)室綜合供應(yīng)商的廣州綠百草整理了一些儀器公司針對(duì)GBT 24800.2-2009化妝品中四十一種糖皮質(zhì)激素的測(cè)定——液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和薄層層析法的全年解決方案進(jìn)行了匯總，以便廣大檢測(cè)單位以及人員參考。

實(shí)驗(yàn)過程用到的整套標(biāo)準(zhǔn)品如下：

Aglinet — 化妝品中 41 種糖皮質(zhì)激素類藥物的測(cè)定

樣品前處理

稱取 0.2 g 樣品，加入3 mL飽和食鹽水和2 mL乙腈（2次）渦旋（IKA Vortex Genius 3）提取目標(biāo)物。合并二次提取的 4 mL 乙腈，加入 40 mL 水、0.2 mL亞鐵氰化鉀、0.2 mL 醋酸鋅，混勻后 5000 rpm 離心 10 min。上清液倒入 Bond Elut Plexa 聚合物小柱 60 mg/3 mL（上接 50 mL磨口漏斗），按固相萃取凈化過程獲得液質(zhì)上機(jī)液。

色譜和質(zhì)譜條件

儀器： Agilent 1260Infinity 液相色譜/6410三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)

色譜柱：Agilent ZORBAXSB-C18，2.1 × 50 mm，1.8 μm，

部件號(hào) 827700-902

進(jìn)樣量：2μ-L

流動(dòng)相： A) 含 0.1% 乙酸的水溶液

B) 含 0.1% 乙酸的乙腈溶液

梯度洗脫：

時(shí)間/min??? ?%B

? ? ?0 ? ? ? ? ? 32

? ? 3.0 ? ? ? ? 32

? ?12.0? ? ? ? 75

? ?14.0? ? ? ? 75

? ?14.1? ? ? ? 32

流速：0.3 mL/min

柱溫：30℃

分離時(shí)間：16 min

離子源：ESI

干燥氣流量：5 L/min

干燥氣溫度：350℃

霧化器壓力：38 psi

化妝品劑型多樣、基質(zhì)復(fù)雜，所涉及的 41 種糖皮質(zhì)激素的藥效從弱效、中效、強(qiáng)效到超強(qiáng)效，分子特征為 17 碳原子環(huán)戊烷并多氫菲母核上具有不同基團(tuán)的修飾，差異較大。從化妝品中完整提取并純化出數(shù)十種待測(cè)目標(biāo)物，并進(jìn)一步建立多組分色譜分離、質(zhì)譜測(cè)定仍有很多困難。因此，好的樣品前處理方法非常關(guān)鍵。本文中使用的 Bond Elut Plexa 小柱，具有純化效果好、回收率高、流速快的特點(diǎn)，可以很好的用在大批量樣品檢測(cè)中，可作為化妝品中 41 種糖皮質(zhì)激素檢測(cè)的參考方法。

賽默飛世爾科技解決方案 - TSQ Quantum Access Max三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)同時(shí)定量化妝品中41種糖皮質(zhì)激素

儀器方法

色譜系統(tǒng)：Accela 600快速液相色譜系統(tǒng)

色譜柱：Hypersil Gold C18(50×2.1mm, 1.9μm)

流動(dòng)相：水（含0.1%甲酸）/乙腈（含0.1%甲酸）

流速：400μL/min；

進(jìn)樣量：10μL

梯度條件：

質(zhì)譜系統(tǒng)：TSQ Quantum Access Max三重四極桿

質(zhì)譜條件：

離子化方式：HESI-Ⅱ

極性模式：正離子

霧化溫度：300℃

鞘氣：40 arb

輔助氣：15 arb

離子傳輸管溫度：300℃

質(zhì)譜掃描參數(shù)：

掃描方式：t-SRM

掃描循環(huán)時(shí)間：0.3 s

分辨率：Q1分辨率分別設(shè)置為0.4和0.7 FWHM

標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品及基質(zhì)樣品的配制

取含41種糖皮質(zhì)激素的混合對(duì)照品溶液，各組分濃度均為0.5 μg/ml，稀釋至0.5ng/mL、1.0ng/ml、2.5ng/ml、5.0ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線工作樣品。分別取空白爽膚水及精華液基質(zhì)溶液，過濾膜后，配制成含20%乙腈的基質(zhì)溶液，并以此基質(zhì)溶液稀釋樣品至0.1ng/mL和0.5ng/mL。

結(jié)果與討論

色譜條件的優(yōu)化

色譜柱的選擇：分別考察了Hypersi l Gold C18 (50×2.1mm, 1.9μm)和Hypersil ODS C18(10×2.1mm, 3μm) 2根規(guī)格不同的C18色譜柱對(duì)41種激素成分的分離效果。結(jié)果表明，前者對(duì)41中組分中色譜保留行為非常相似的物質(zhì)能實(shí)現(xiàn)更好的分離，且由于前者粒徑小，能獲得更高的柱效。同時(shí)，由于Accela 600液相泵系統(tǒng)耐壓能力強(qiáng)，可使用高流速而大大減少色譜分離所需時(shí)間。

流動(dòng)相及洗脫條件的選擇：分別考察了甲醇/水（0.1%甲酸）、乙腈/水（0.1%甲酸）等流動(dòng)相系統(tǒng)對(duì)于41種激素成分的分離效果。結(jié)果表明，采用乙腈（0.1%甲酸）/水（0.1%甲酸）系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫更有利于41種激素的色譜分離?？紤]到化妝品基質(zhì)的影響，延后目標(biāo)組分的保留時(shí)間可減小基質(zhì)的干擾，因此降低初始流動(dòng)相中乙腈的比例至20%，得到的譜圖。

質(zhì)譜條件的優(yōu)化

根據(jù)待測(cè)糖皮質(zhì)激素分子結(jié)構(gòu)及參考國(guó)標(biāo)[12] ,選擇ESI(+) 作為離子化模式 ,將0.5μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液通過蠕動(dòng)泵連續(xù)進(jìn)樣，由TSQ Tune質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化軟件自動(dòng)獲得最佳的子離子、碰撞能量及透鏡電壓。最終所選擇的母離子、特征離子和碰撞能量詳見表 1。圖3為部分糖皮質(zhì)激素的提取離子流圖（0.5ng/mL）。附表1：離子對(duì)信息：母離子、特征離子、碰撞能量和掃描時(shí)間。

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方法學(xué)考察

靈敏度及線性：將標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（0.5ng/ml、1.0ng/ml、2.5ng/ml、5.0ng/ml、10ng/ml 、25ng/ml、50ng/ml 、100ng/ml）依次進(jìn)樣，以峰面積對(duì)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，各激素成分在0.5-100ng/ml范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)大于0.99（見表2）；基質(zhì)中各種激素的最低檢出限為0.1ng/ml，最低定量限為0.5ng/mL。精密度：取0.5ng/ml基質(zhì)加標(biāo)溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，各色譜峰保留時(shí)間穩(wěn)定，精華液基質(zhì)中各組分峰面積的RSD≤9.74%（見表2）；爽膚水基質(zhì)中各組分峰面積的RSD≤9.77%（見表2）。結(jié)果表明該方法穩(wěn)定、可靠。

不同分辨率設(shè)置對(duì)方法靈敏度的影響以精華液基質(zhì)樣品為例，考察儀器分辨率設(shè)置對(duì)靈敏度的影響：下圖中同行左側(cè)色譜圖為0.7FWHM條件下獲得，右側(cè)為0.4FWHM條件下獲得。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用Thermo ScientificTSQ Quantum Access Max三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，建立了41種糖皮質(zhì)激素同時(shí)測(cè)定的方法，以基質(zhì)樣品為主考察了方法的靈敏度及重現(xiàn)性，同時(shí)考察了儀器不同分辨率設(shè)置對(duì)化合物檢測(cè)的影響。本方法對(duì)化妝品基質(zhì)中41種糖皮質(zhì)激素的定量下限為0.5ng/mL，最低檢測(cè)限可達(dá)0.1ng/mL。通過提高Q1的分辨率能有效降低基質(zhì)干擾，提高部分化合物的靈敏度。分別以爽膚水空白基質(zhì)、精華液空白基質(zhì)與對(duì)照液進(jìn)樣比較，由色譜圖可看出所建立的方法特異性高，能用于化妝品中41種糖皮質(zhì)激素的檢測(cè)。分別在爽膚水基質(zhì)、精華液基質(zhì)中添加41種糖皮質(zhì)激素，濃度均為0.5ng/mL，各連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5針方法重現(xiàn)性良好。TSQ QuantumAccess Max三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)配有可加熱的電噴霧電離源、聚焦離子束的透鏡組件、90度彎曲碰撞池等，可有效提高信號(hào)響應(yīng)，并降低中性噪音，是化妝品中痕量非法添加成分檢測(cè)的最佳選擇。

本方法采用Thermo scientificTSQ Quantum Access Max三重四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)，建立了同時(shí)定量爽膚水和精華油中41種糖皮質(zhì)激素的液質(zhì)聯(lián)用法，最低定量限為0.5ng/ml，檢測(cè)限為0.1ng/ml。該方法簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng)且靈敏度高，可應(yīng)用于化妝品的實(shí)際檢測(cè)。

最后附上原GBT 24800.2-2009國(guó)標(biāo)中推薦用到的儀器耗材清單：

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