DNA電子顯微鏡技術(shù)的應(yīng)用,精細(xì)菌體科研光學(xué)儀器

DNA的電子顯微鏡觀察

  與一般的手段不同，DNA的電子顯微鏡檢查是一種簡
單、迅速而又可靠的技術(shù)。由于可以對單個分子進(jìn)行觀察，
并且所有的分子都可以觀察到，所以，它能很好地補(bǔ)充凝膠
電泳技術(shù)的不足。在凝膠電泳中，看到的是長度相同的一群
分子。電鏡除了可用于DNA的一般觀察以外，還可進(jìn)行異
源雙鏈的檢查，從而確定非同源區(qū)的位置。

原理
用水樣法和醋酸鈾染色法觀察DNA。
這是一項(xiàng)非?？焖俚姆椒?，當(dāng)需要用定性的方法確定
一個DNA樣品的分子大小或結(jié)構(gòu)拓樸學(xué)時(shí)非常有用。第二部
分將集中討論異源雙鏈的形成以及用甲酰胺法觀察異源雙
鏈。起初，可用噬菌體進(jìn)行異源雙鏈分析。后來，可以對實(shí)
驗(yàn)過程中產(chǎn)生的缺失進(jìn)行定位。

實(shí)驗(yàn)步驟
  1．演示檢查電子顯微鏡。
  2．按照實(shí)驗(yàn)方法二十七，在電鏡下觀察用水樣法制備的
DNA樣品。DNA應(yīng)事先準(zhǔn)備好。
  3．按照實(shí)驗(yàn)方法二十八在電鏡下觀察用甲酰胺法制備
的DNA樣品。用于異源雙鏈分析的噬菌體原液應(yīng)事先準(zhǔn)備
好。

  4．用最好的銅網(wǎng)樣品，攝下異源雙鏈的圖像。

  5．對感興趣的噬菌體進(jìn)行電子顯微鏡異源雙鏈分析

這是一個可靠的方法，但是需要較長的離心時(shí)間。
污染的DNA、RNA和某些蛋白質(zhì)在16小時(shí)之內(nèi)不會達(dá)到平
衡，它們會分布于整個梯度。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是，噬菌體在
一個遠(yuǎn)沒有上述方法所用的那樣陡的梯度中即可到達(dá)平衡密
度。如果噬菌體制備物是不均一的，即噬菌體含有的DNA
大小不同，結(jié)果所觀察到的噬菌體帶就會不只一條。
  觀察·個微弱噬菌體帶的最好方法是，用一條來自于顯
微鏡光源的平行光，從離心管的上部照射下來。在離心管的r
背面放一個平的黑色背景也有利于觀察。

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