? ? ? 隨著生活水平的提高，人們的關(guān)注重心已經(jīng)從溫飽問(wèn)題轉(zhuǎn)移到更高的追求：精神水平的提升和個(gè)人生命的長(zhǎng)度。增加人類壽命，勢(shì)必要克服各種各樣疾病的困擾?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究重心在于盡早發(fā)現(xiàn)和精準(zhǔn)治療，表現(xiàn)為生命體中生物標(biāo)記物（Biomarker）的濃度水平和治療藥物的代謝過(guò)程等研究。

目前，醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室中的特定診斷通常使用免疫檢測(cè)和分子檢測(cè)手段，交叉反應(yīng)和干擾較為嚴(yán)重；作為替代手段，LC/MS基于色譜和質(zhì)量選擇性對(duì)化合物進(jìn)行分離，靈敏度更高；可有效監(jiān)控治療藥物，節(jié)省時(shí)間和成本。

???? 影響LC/MS實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素較多，在保證系統(tǒng)運(yùn)行基礎(chǔ)上，如何保證高靈敏度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果呢？可從以下兩方面考慮：

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1.?? 前處理

在LC/MS分析中，干擾物與分析物共流出，會(huì)影響液滴形成或引起共電離等問(wèn)題，造成

分析物離子化水平不穩(wěn)定。

磷脂類化合物是分析血液中生物樣品時(shí)，造成離子抑制的一個(gè)主要原因：

磷脂類化合物結(jié)構(gòu)

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傳統(tǒng)的血液前處理方法，包括蛋白沉淀、液液萃取和固相萃取存在或多或少的局限性，例如只能沉淀克級(jí)蛋白和與目標(biāo)分析物共萃取等。

默克全新的固相萃取產(chǎn)品HybridSPE?-Phosphorlipid，基于物理和化學(xué)作用，可同時(shí)有效去除血液中的蛋白和磷脂，提高液質(zhì)檢測(cè)的靈敏度。

HybridSPE?產(chǎn)品

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96孔板規(guī)格的HybridSPE進(jìn)行“仿真沉淀”：

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維生素D及相關(guān)代謝物的LC/MS實(shí)驗(yàn)

維生素D可以促進(jìn)兒童骨骼增長(zhǎng)，降低老年人骨質(zhì)疏松等。維生素D缺陷，自發(fā)現(xiàn)以來(lái)，一直是研究重點(diǎn)。維生素D以兩種形式存在：維生素D2和維生素D3 ，兩者在肝臟中進(jìn)行代謝。其中25-羥基類代謝產(chǎn)物濃度水平，可用于維生素D相關(guān)疾病的診斷依據(jù)。最近研究表明，將非活性的3-epi維生素代謝產(chǎn)物與其他代謝產(chǎn)物分離開(kāi)，更有助于疾病研究。采用LC/MS對(duì)代謝產(chǎn)物濃度研究的關(guān)鍵，在于血液中相關(guān)蛋白的去除。

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維生素D及相關(guān)代謝物的結(jié)構(gòu)和分子量信息

維生素D及相關(guān)代謝物在色譜柱Ascentis Express F5（150 x 2.1 mm, 2.7 μm）上的分離

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維生素D及相關(guān)代謝物經(jīng)不同前處理方法得到的回收數(shù)據(jù)對(duì)比

基于Ascentis Express F5色譜柱的選擇性，可建立一個(gè)快速有效的LC/MS方法，用于體內(nèi)維生素D代謝物的研究。采用HybridSPE?，對(duì)血液樣品進(jìn)行處理，去除其中的磷脂和蛋白，可有效提高分析方法的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率。

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2.???? 溶劑

???? 溶劑等級(jí)不同，其所含有的雜質(zhì)含量不同， LC-MS分析時(shí)會(huì)產(chǎn)生不同的基線背景和噪音，影響檢測(cè)的靈敏度：

通過(guò)注射泵將兩種不同級(jí)別的乙腈直接注射入MS系統(tǒng)

為保證高靈敏度的LC/MS分析，需采用高級(jí)別的溶劑，以利血平作為示例。

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利血平測(cè)試

將利血平標(biāo)準(zhǔn)品通過(guò)注射泵注入MS系統(tǒng)，將所得的信號(hào)強(qiáng)度與背景噪音強(qiáng)度進(jìn)行比較：

不同等級(jí)溶劑下得到的利血平LC/MS圖譜

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對(duì)利血平的分子離子峰的信噪比進(jìn)行計(jì)算：

不同等級(jí)溶劑下得到的利血平分子離子峰信噪比值

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利血平分子離子峰信噪比值結(jié)果表明，采用超梯度級(jí)的乙腈，所得到的信噪比值不僅高于梯度級(jí)乙腈得到的結(jié)果，而且明顯高于其他兩個(gè)品牌LC/MS溶劑測(cè)得的信噪比值。

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結(jié)論：

為保證高靈敏度的LC/MS分析結(jié)果，可從兩方面著手：

1.?????? 采用HybridSPE?對(duì)樣品中的磷脂和蛋白進(jìn)行高效去除；

2.?????? 采用超梯度級(jí)的乙腈，降低LC/MS分析中的背景值，提高分析峰信噪比。