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3時(shí)長含有! 研究者透過單細(xì)胞瑪曼光譜安核反應(yīng)堆標(biāo)記技術(shù)開發(fā)計(jì)劃成更快藥敏檢查新方法(FRAST)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-06-19  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):59
核心提示:世衛(wèi)組織專家估計(jì),到2050年,由于抗生素耐藥導(dǎo)致的死亡人數(shù)可能從目前估計(jì)的每年70萬人增加到每年1000萬人,世界生產(chǎn)總值的損失將達(dá)到100萬億美元。導(dǎo)致耐藥菌出現(xiàn)和蔓延的一個(gè)主要原因是在治療感染類疾病時(shí)存在濫用和過度使用抗生素的情況。目

世衛(wèi)組織專家估計(jì),到2050年,由于抗生素耐藥導(dǎo)致的死亡人數(shù)可能從目前估計(jì)的每年70萬人增加到每年1000萬人,世界生產(chǎn)總值的損失將達(dá)到100萬億美元。導(dǎo)致耐藥菌出現(xiàn)和蔓延的一個(gè)主要原因是在治療感染類疾病時(shí)存在濫用和過度使用抗生素的情況。

目前病原菌感染在臨床的檢驗(yàn)流程如圖1所示,往往需要3-7天才能從病人標(biāo)本中分析出病原菌鑒定和抗生素藥敏的結(jié)果。快速檢測(cè)感染細(xì)菌的藥敏特性對(duì)確保有效抗生素的使用和減少對(duì)廣譜藥物的需求起著關(guān)鍵作用。那么如何準(zhǔn)確且快速的判斷感染細(xì)菌的藥敏特性呢??

近日,中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所的宋一之、復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院的王明貴和英國牛津大學(xué)的Wei Huang聯(lián)合團(tuán)隊(duì)利用單細(xì)胞拉曼光譜-重水標(biāo)記聯(lián)用技術(shù)開發(fā)了一種適用于血液和尿液標(biāo)本的快速藥敏檢測(cè)方法(FRAST),該方法將尿液和血液標(biāo)本的藥敏檢測(cè)時(shí)間由3-4天分別縮短為3小時(shí)和21小時(shí)。?

圖1. 傳統(tǒng)尿液和血液樣本的藥敏檢測(cè)時(shí)間與FRAST的比較?

FRAST方法基于拉曼光譜——重水標(biāo)記聯(lián)用技術(shù),其主要原理為,細(xì)菌可通過重水(氘代水)培養(yǎng)可實(shí)現(xiàn)氘元素的標(biāo)記,使拉曼光譜中的碳-氘峰成為單細(xì)胞水平細(xì)菌代謝活動(dòng)的標(biāo)記物。在抗生素作用下,易感菌代謝活性會(huì)受到抑制,而耐藥菌則不受影響并產(chǎn)生明顯的碳-氘峰,因此可以克服臨床微生物試驗(yàn)對(duì)長時(shí)間培養(yǎng)的要求,使快速藥敏成為可能。?

FRAST方法的具體流程如圖2所示。對(duì)于尿液感染標(biāo)本,首先進(jìn)行離心收集細(xì)菌,然后在共聚焦顯微拉曼系統(tǒng)下對(duì)細(xì)菌觀察并進(jìn)行拉曼指紋圖譜的采集,這一過程可判斷尿液中是否有菌及菌量,同時(shí)將采集到的圖譜利用機(jī)器學(xué)習(xí)模型與革蘭氏陰性菌和陽性菌的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì),準(zhǔn)確預(yù)測(cè)樣品中細(xì)菌的革蘭氏陰陽性并以此選擇合適的藥敏板。將尿液加入到藥敏板并作用1h后加入重水,待重水標(biāo)記1h后離心洗滌樣品并采集拉曼信號(hào),通過對(duì)抗生素作用下的C-D峰的強(qiáng)度的統(tǒng)計(jì)計(jì)算讀取最小抑菌濃度(MIC)。對(duì)于血液標(biāo)本,則是在血培養(yǎng)瓶內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),血培養(yǎng)瓶報(bào)陽后用同樣的方法采集拉曼光譜并計(jì)算MIC值。?

?圖2. FRAST用于臨床尿液樣本和血液樣本的藥敏試驗(yàn)流程圖?

在該研究中,團(tuán)隊(duì)對(duì)包含質(zhì)控菌株和臨床原始標(biāo)本在內(nèi)的超過3000個(gè)樣本采集了6萬余張單細(xì)胞拉曼光譜,并與臨床金標(biāo)準(zhǔn)(微量肉湯稀釋法或臨床自動(dòng)藥敏系統(tǒng))進(jìn)行了對(duì)比,結(jié)果顯示FRAST方法對(duì)革蘭氏染色結(jié)果的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率為100%(圖3),藥敏結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)總體一致率大于88%。與其他基于Raman-DIP的病原菌藥敏研究相比,該研究國際首次證明單細(xì)胞拉曼與重水標(biāo)記結(jié)合可用于分析真實(shí)的尿液或血液標(biāo)本中病原菌的耐藥性,而且基于拉曼的革蘭氏染色預(yù)測(cè)方法的整合使得FRAST成為相對(duì)獨(dú)立完整的測(cè)試方法,臨床醫(yī)生可以無需其他手段輔助,完成“從樣本到報(bào)告”的快速診斷。與近年來發(fā)展較快的耐藥分子診斷技術(shù)相比,F(xiàn)RAST藥敏是基于抗生素對(duì)細(xì)菌作用的表型,因此該結(jié)果不會(huì)因未知的耐藥機(jī)制或基因表達(dá)調(diào)控影響而產(chǎn)生對(duì)藥敏的誤判。?

?圖3. FRAST方法可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)病原菌的革蘭氏染色分類結(jié)果?

這一成果近期發(fā)表在Analytical Chemistry上,論文標(biāo)題為Development of a Fast Raman-Assisted Antibiotic Susceptibility Test (FRAST) for the Antibiotic Resistance Analysis of Clinical Urine and Blood Samples。該研究得到了科技部重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、中科院科研儀器設(shè)備研制等項(xiàng)目資助。?

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關(guān)鍵詞: 藥敏 FRAST 方法 細(xì)菌 尿液
 
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