細(xì)胞分選儀通過(guò)磁珠分選的原理進(jìn)行正選或者負(fù)選細(xì)胞,分選的細(xì)胞可立即用于流式細(xì)胞分析、功能性研究或下游分析,在短至25分鐘之內(nèi),可一次同時(shí)分選多個(gè)樣品;也可以同一個(gè)樣品中連續(xù)分選出不同類(lèi)型的細(xì)胞,大限度地減少了樣品處理工作。 細(xì)胞分選儀比僅用于分析對(duì)樣本制備要求更高。需要在較短的時(shí)間內(nèi)完成以確保分到高純度的活細(xì)胞同時(shí)要具備功能性如增殖、分泌細(xì)胞因子等。要求高品質(zhì)的單細(xì)胞懸液以確保良好的雙聯(lián)體鑒別,并在分選過(guò)程中因發(fā)生沖突而丟棄的盡量少。 細(xì)胞分選儀對(duì)緩沖液的選擇分析: 處理哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常用培養(yǎng)基/緩沖液都是在1個(gè)大氣壓下使用的(實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái)上或CO2培養(yǎng)箱內(nèi)),但在大多數(shù)細(xì)胞分選儀的分選倉(cāng)內(nèi),壓力通常會(huì)超過(guò)2-4個(gè)大氣壓(具體取決于選擇噴嘴尺寸和分選條件)。 樣品分選緩沖液或分選收集緩沖液:DPBS或HBSS(去除Ca2+和Mg2+),均含10-25mM HEPES和蛋白質(zhì)(通常為1-2%的熱滅活血清或BSA),以及最近的推薦使用BD FACS Pre-Sort Buffer外加0.2-2%的蛋白質(zhì)(濃度取決于應(yīng)用)。不推薦RPMI或DMEM之類(lèi)的碳酸氫鹽介質(zhì)緩沖液。原因是: 1.與儀器上常使用的鞘液成分不同(碳酸氫鹽與磷酸鹽); 2.設(shè)計(jì)上需要5%的CO2的環(huán)境來(lái)維持生理pH; 3.通常包含二價(jià)陽(yáng)離子(Ca2+和Mg2+)和苯酚(高熒光背景)。若必須使用碳酸氫鹽介質(zhì),則應(yīng)不含酚無(wú)Ca2+或Mg2+,或在25 mM的HEPES和蛋白質(zhì)基礎(chǔ)上添加~1 mM EDTA來(lái)減少二價(jià)陽(yáng)離子副作用(使細(xì)胞 發(fā)粘 )。據(jù)報(bào)道,HEPES緩沖的碳酸氫鹽培養(yǎng)基對(duì)光敏感109,通常流式樣本均需避光放置。