高分辨率熔解曲線(high-resolution melting，HRM)是一種基于單核苷酸熔解溫度不同而形成不同形態(tài)熔解曲線的基因分析新技術(shù)，具有極高的敏感性，可以檢測(cè)出單個(gè)堿基的差異。

 作為一種高效穩(wěn)健的 post－PCR 技術(shù)，它不受突變堿基位置與類型的限制，無(wú)需序列特異性探針，在PCR結(jié)束后直接運(yùn)行高分辨熔解即可完成對(duì)樣品的分析。HRM技術(shù)因操作簡(jiǎn)便快捷、成本低廉、結(jié)果準(zhǔn)確，并且實(shí)現(xiàn)了真正的閉管操作而受到普遍關(guān)注。

 HRM原理：

 在PCR反應(yīng)前將新型DNA飽和熒光染料加入反應(yīng)體系，然后將PCR產(chǎn)物直接導(dǎo)入高分辨熔解分析儀中，在一定的溫度范圍內(nèi)將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行加熱變性，儀器的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)采集、分析熒光信號(hào)并繪制溫度熔解曲線，根據(jù)不同熔解曲線形狀來(lái)區(qū)分（單個(gè)）堿基差異。

  最廣泛的 HRM 分析應(yīng)用領(lǐng)域是基因篩查?；蚝Y查是搜索 PCR 擴(kuò)增片段中是否存在未知變異，它可在測(cè)序步驟之前進(jìn)行或者作為替代測(cè)序方法。由于 PCR 產(chǎn)物突變可導(dǎo)致 DNA 熔解曲線的形狀改變，因此它可以利用 HRM分析檢測(cè)。雜交雙鏈 DNA 樣本擴(kuò)增并熔解時(shí)，其熔解曲線不同于純合野生型或突變樣本。如果操作得當(dāng)，可以減少至少95%的測(cè)序工作量。隨著DNA染料和分析儀器的發(fā)展，HRM技術(shù)還將繼續(xù)完善和改進(jìn)，在遺傳病分子診斷領(lǐng)域發(fā)揮更多的作用。

 HRM應(yīng)用：

高分辨熔解曲線分析技術(shù)(HRM) 疑問(wèn)與解答

  作為專注于PCR領(lǐng)域超過(guò)24年的高品質(zhì)試劑供應(yīng)商，Solis BioDyne為您推薦，5X熱啟動(dòng)EvaGreen高分辨率熔解曲線分析-預(yù)混Mix（PCR）：

 * 不含參比染料ROX，如需要含ROX，請(qǐng)選擇：08-33-00001

 5X熱啟動(dòng)EvaGreen高分辨率熔解曲線分析-預(yù)混Mix（PCR）提供如下組分：

 1Negrisolo, Susanna et al. Could the interaction between LMX1B and PAX2 influence the severity of renal symptoms?  European Journal of Human Genetics 26 (2018): 1708-1712.

使用Solis試劑盒，分析PAX2基因4號(hào)外顯子的錯(cuò)義突變

 2Gaczkowska, Agnieszka, et al. Association of CDKAL1 Nucleotide Variants with the Risk of Non-Syndromic Cleft Lip with or without Cleft Palate.  Journal of Human Genetics, vol. 63, no. 4, 2018, pp. 397 406.  

使用Solis試劑盒，分析CDKAL1基因SNP

 HRM分析成功的關(guān)鍵： 

 1.保持較短的擴(kuò)增片段，實(shí)現(xiàn)最高的靈敏度。與較大的擴(kuò)增片段相比，100 bp 左右的擴(kuò)增片段可簡(jiǎn)化單核苷酸熔解曲線的檢測(cè)。

 2.確保 PCR 擴(kuò)增片段的特異性。錯(cuò)配產(chǎn)物和引物二聚體可使數(shù)據(jù)解釋復(fù)雜化。引物濃度低于 200nM，MgCl2 在 1.5 mM至3 mM 范圍及使用熱啟動(dòng)DNA 聚合酶將有助于獲得高特異性。

 3.確保反應(yīng)使用足夠的模板。一般而言，Ct 應(yīng)低于30，以生成足夠的材料，實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的熔解分析。

 除了上述的高效穩(wěn)健的HRM分析預(yù)混Mix產(chǎn)品，Solis BioDyne為客戶提供終點(diǎn)PCR（end-point PCR），qPCR（real-time PCR），反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse transcription），以及其它PCR所需的配套試劑。產(chǎn)品線縱覽圖如下：

 Solis BioDyne來(lái)源于歐盟-愛(ài)沙尼亞共和國(guó)，專注PCR領(lǐng)域超過(guò)24年，Solis BioDyne一直致力于開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)高品質(zhì)的生命科學(xué)試劑，現(xiàn)已成為當(dāng)今歐洲領(lǐng)先的試劑供應(yīng)商之一。高標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和服務(wù)使Solis BioDyne成為全球值得信賴的首選PCR供應(yīng)商。我們的DNA聚合酶，PCR Master Mixes，qPCR Mixes和其它試劑被全球110多個(gè)國(guó)家的研究者所使用，包括頂級(jí)研究機(jī)構(gòu)和生物技術(shù)公司。