組織學是病理科研究的重要工具。它在診斷，癌癥監(jiān)測，其他疾病，以及病原體的檢測和鑒定中發(fā)揮十分的關鍵作用。水是許多組 織學試劑和緩沖液的重要組成成分 1，用于漂洗和漂浮浴。質量差的水可能會產生人造物而影響染色結果，也會影響顏色密度，特 異性或減低化學染料的穩(wěn)定性2，自來水可能會因季節(jié)不同而不同(pH，離子，有機物)，這也可能會對實驗結果的重現(xiàn)性產生影響。 無論是去離子水和蒸餾水，購買的瓶裝水還是從自來水生產，也可能在質量上有差異，并會隨時間而變化。而現(xiàn)如今，組織學工作 者可以依靠多元化的水純化技術得到穩(wěn)定可靠的試劑水。 結果和討論 在本研究中，我們比較了 Elix? 系統(tǒng)純化水，反滲透，電流去離子和紫外技術，是否可以應用于組織學染色實驗。 1. 特殊染色 一些特殊染色技術，如銀染，因其對水中污染物非常敏感度而聞名 3，Grocott's 使用肺組織中肺囊蟲的 GMS 染色證明。當使用 來自 Elix? 系統(tǒng)純化水用于試劑的制備，沒有任何背景噪音，能獲得可靠的結果(圖 1)。用 Elix? 系統(tǒng)純化水可以代替蒸餾水或 去離子水用于 GMS 染色。 Figure 1. Photomicrographs of lung tissue with Pneumocystis jirovecii, stained with GMS stain. Methenamine silver nitrate solutions were prepared with (A) Elix? purified water, (B) distilled water, or (C) deionized water. Pictures courtesy of E. Macrea and W. Lange. 圖 2 說明了水中雜質如金屬，有機分子(腐殖酸，主要來源于自來水)，二氧化硅和細菌副產物(內毒素)對 GMS 染色的影響。 為了獲得最佳效果，因此也建議使用不含這些雜質的純凈水。 Figure 2. Methenamine silver nitrate solutions were prepared with Elix? purified water and added contaminants: (D) chromium, (E) copper,(F) nickel, (G) humic acid, (H) silica, (I) endotoxin. Pictures courtesy of E. Macrea and W. Lange. 2. Hematoxylin and Eosin Stain H E 染色可能是組織學實驗中使用最廣泛的染色方法。 自來水可能由于其 pH 值的波動，而得到不穩(wěn)定的藍調，甚至可能含有 可能導致蘇木精褪色的物質(鐵，硫或氯)。 Elix? 系統(tǒng)純化水代替所有漂洗步驟中的自來水，以及制備藍染色的試劑，可以得到同等的染色特異性和顏色(圖 3)。 Figure 3. Photomicrographs of tonsil tissue stained with H E. Rinsing steps and Scott’s tap water substitute prepared with (A) Elix? purified water or (B) Tap water. Pictures courtesy of E. Macrea and W. Lange. 實驗步驟 Grocott's Methenamine Silver (GMS) Stain 使用商業(yè)化的GMS 試劑盒。 在第一個實驗中，分別用蒸餾水，去離子水，Elix? 系統(tǒng)純化水制備甲胺硝酸銀溶液。 在第二個實驗中， Elix? 水中摻入一些常見的污染物(金屬：1 mg / L 硫酸鉻鉀，硫酸銅或硫酸鎳 ; 有機分子：1mg / L 腐殖酸 ; 10ppm 硅酸鈉 ; 細菌副產物：1000 EU / mL 內毒素)。 Hematoxylin and Eosin (H E) Stain H E 染色過程中幾乎總是使用自來水用于蘇木精前后的沖洗，分化和藍染步驟。 在本研究中，所有的漂洗步驟，以及藍染色溶 液的制備完全用自來水或來自 Elix? 系統(tǒng)的純化水。 現(xiàn)代生物醫(yī)學實驗室使用的技術依靠高品質的試劑，以獲得可靠和可重復的結果。如果水中含有干擾組織學實驗的污染物：如離子 和金屬，可能會影響pH 值并與染料相互作用; 有機物和內毒素，可能影響染色過程; 細菌和顆粒，可能沉積在載片上并產生人造物。 而結合幾種水純化技術(反滲透，電流去離子和紫外線)產生的純水可以提供一致可靠的質量，適用于廣泛的染色實驗，如 H E 染色，銀染。而且可以替代蒸餾水和去離子水在組織學中的應用，提供更高質量更可靠的結果，同時降低水中的污染物造成的風 險。最后，水純化系統(tǒng)可以提供在線水質監(jiān)測以及嵌入式 e-solution5 數(shù)據(jù)管理工具，確保數(shù)據(jù)的可靠性和可追溯性，是一個很 好實驗室的資產，并提供 ISO?15189：2012.6 等標準的認證 For more information about hematology and histology, please visit http://www.sigmaaldrich.com/life-science/cell-biology/hematology-and-histology.html Acknowledgments The authors thank Ethel Macrea, HT (ASCP) QIHC and Wendy Lange, HT (ASCP) for their technical expertise and support. References 1. J.D. Bancroft and M. Gamble; Theory and Practice of Histological Techniques, Churchill Livingstone Elsevier, 6th edition, (2008). 2. R.W. Guy, "The chemistry and electronic spectroscopy of dyes and stains" in Laboratory Histopathology: A Complete Reference, A. E. Woods, R. C. Ellis, Churchill Livingstone, (1994). 3. W.E. Grizzle, "Theory and Practice of Silver Staining in Histopathology," in Journal of Histotechnology (1996), 19:3, 183-195. 4. Guidelines for Hematoxylin Eosin staining. National Society for Histotechnology, 1973. Reviewed July 2001. 5. Millitrack? e-Solutions, A unique set of data management and monitoring software solutions for water purification systems, Merck; www.merckmillipore.com/millitrack-esolutions. 6. ISO? 15189: 2012 Medical laboratories – Requirements for quality and competence, http://www.iso.org.
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