合肥合生生物工程有限公司成立于2019年，注冊(cè)資金100萬(wàn)元，公司辦公場(chǎng)所坐落合肥光谷生物城。合生生物致力于為行業(yè)內(nèi)的客戶提供技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓等服務(wù)，秉承著“我們用心 客戶省心”的服務(wù)理念打造出一支敢于創(chuàng)新、敢于挑戰(zhàn)的綜合服務(wù)團(tuán)隊(duì)。

合生生物主營(yíng)業(yè)務(wù)：大鼠纖維環(huán)細(xì)胞、細(xì)胞庫(kù)、試劑、/抗原、、多肽、耗材/消耗品、實(shí)驗(yàn)儀器/設(shè)備、器械等。

合生生物以技術(shù)為主導(dǎo)，產(chǎn)品的質(zhì)量為核心，服務(wù)體系為保障，發(fā)揮人才優(yōu)勢(shì)，長(zhǎng)期致力于打造成國(guó)內(nèi)先進(jìn)的科研企業(yè)與機(jī)構(gòu)。

合生生物持續(xù)通過(guò)開(kāi)放的合作態(tài)度、專業(yè)的服務(wù)機(jī)制、持續(xù)的**理念全力打造企業(yè)的核心競(jìng)爭(zhēng)力為成為上等的行業(yè)服務(wù)供應(yīng)商銳意進(jìn)取。大鼠纖維環(huán)細(xì)胞。復(fù)蘇操作流程

 

1. 準(zhǔn)備工作，開(kāi)水浴鍋，預(yù)熱試劑，超凈工作臺(tái)紫外照射 30min,找到對(duì)應(yīng)細(xì)胞在液氮罐中的位置

2. 紫外照射后風(fēng)機(jī)吹 10min 后，酒精擦拭臺(tái)面，放入試劑和離心管，取 15ml 離心管，加入 9ml 培養(yǎng)液

3. 在液氮罐中取出細(xì)胞，先擰松放液氮，再擰緊，將凍存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min

4. 將凍存管?chē)娋凭蠓湃氤瑑襞_(tái)內(nèi)，擦干管壁，用 1ml 頭將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到已加培養(yǎng)液的離心管中

5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平

6. 將離心好的細(xì)胞棄上清，加入 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，用移液管吹打 8-10 次， 避免產(chǎn)生氣泡，將細(xì)胞懸液接種到 10cm 培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加 5ml 培養(yǎng)液

7. 混勻，十字法或者 8 字法

8. 將混好的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

 大鼠纖維環(huán)細(xì)胞。注意事項(xiàng)

 

1. 上述操作方案的數(shù)據(jù)可作為參考，實(shí)際操作已實(shí)驗(yàn)室配備的耗材為準(zhǔn)，

2. 凍存時(shí)含 10%DMSO,事先加 9ml 培養(yǎng)液是為了稀釋 DMSO，理論上 1%DMSO

對(duì)細(xì)胞性

3. 隔著 PE 手套能有效防止水浴過(guò)程中導(dǎo)致污染

4. 重懸的體積只是作為參考，具體的根據(jù)需要可進(jìn)行調(diào)整

5. 由于復(fù)蘇過(guò)程中已經(jīng)離心，第二天可根據(jù)實(shí)際情況選擇換液或者不換液（主要針對(duì)貼壁細(xì)胞）大鼠纖維環(huán)細(xì)胞。培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL大鼠纖維環(huán)細(xì)胞。懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。大鼠纖維環(huán)細(xì)胞。培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到大鼠纖維環(huán)細(xì)胞。后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀大鼠纖維環(huán)細(xì)胞。說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn) 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活 力，請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4.靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度80%左右時(shí)正常傳代。
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6.建議客戶收到大鼠纖維環(huán)細(xì)胞。后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 志偉技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

大鼠淋巴成纖維細(xì)胞：待審核