公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸，經(jīng)過(guò)逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時(shí)停止其生命活動(dòng)，保存其活性，使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等國(guó)際品牌.

產(chǎn)品名稱(chēng)

生長(zhǎng)特性

貨號(hào)

正常大鼠腎細(xì)胞；NRK-52E說(shuō)明書(shū)

貼壁生長(zhǎng)

CS-X8161

細(xì)胞名稱(chēng) 正常大鼠腎細(xì)胞；NRK-52E

形態(tài)特性  上皮細(xì)胞

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性  

培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5

傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿(mǎn)。

傳代情況 P(16+5)

凍存條件  完全培養(yǎng)基+8DMSO

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．正常大鼠腎細(xì)胞；NRK-52E說(shuō)明書(shū)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

以下是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：

ANKRD42 英文名稱(chēng)： 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體 0.2ml

Anti-TRPV1/VR1 辣椒素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Human growth-associated protein 43,GAP-43 ELISA Kit 人生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Socs 3 細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml

sTfR(Human soluble transferrin receptor) ELISA Kit 人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 96T

NIR2 英文名稱(chēng)： 膜磷脂轉(zhuǎn)移蛋白1抗體 0.2ml
正常大鼠腎細(xì)胞；NRK-52E說(shuō)明書(shū)Rhesus antibody Rh phospho-SNAI2(Ser155+Ser158+Ser160+Tyr164+Tyr169) 磷酸化鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體 規(guī)格 0.1ml

Goat Anti-human IgM 羊抗人IgM (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg

Anti-phospho-CaMK2a (pThr286)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit Anti-Guinea IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗豚鼠IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4抗體 Anti-FGFR4 0.1ml

Goat Anti-Mouse IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml

phospho-Fos B (Ser27) 英文名稱(chēng)： 磷酸化癌基因FOS蛋白B抗體 0.1ml
操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。