文章標題：M17細胞 細胞株培養(yǎng)

關(guān)鍵詞：M17細胞培養(yǎng)，M17細胞價格，M17細胞來源背景，M17細胞，細胞株培養(yǎng)

中文名稱：人神經(jīng)母細胞瘤

生長狀態(tài)：貼壁生長

1.試劑和溶液

1）轉(zhuǎn)印緩沖液：0.025M Tris base , 0.187 M甘氨酸 , 25%甲醇

2）氨基黑溶液：0.1% 酸性黑10B

3）1 TBST：25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl ,0.1%Tween 20

4）封閉液：TBST配制的5%牛奶

5）抗體稀釋液：TBST配制的5%牛奶

6）顯色系統(tǒng)：ECL顯色

2.實驗步驟

1電泳：將裂解液進行SDS-PAGE電泳，80v，30分鐘，120v，90分鐘；

2轉(zhuǎn)膜：PVDF膜在甲醇中浸泡約30秒左右，濾紙浸泡在轉(zhuǎn)印緩沖液預(yù)濕，半干法轉(zhuǎn)印到PVDF膜上，10v，150分鐘；

3染色：氨基黑染色5分鐘，甲醇褪去背景色，觀察條帶；

4膜活化：將PVDF膜置于甲醇活化1min，用純水洗膜2次后再用TBST洗滌3次；

5封閉：將膜條置于5%牛奶或2% BSA中，室溫混搖2h；

6一抗孵育：將待檢抗體用3%牛奶或2% BSA稀釋到合適濃度（參照抗體說明書，根據(jù)客戶預(yù)實驗結(jié)果，稀釋度上下浮動一個數(shù)量級都為正常），將膜放入對應(yīng)的已稀釋待檢樣品中，置4℃混搖孵育隔夜；

7洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3 5min；

8二抗孵育：將膜取出放入稀釋好的HRP標記的二抗（參照二抗說明書進行稀釋）中，室溫混搖2h；

9洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3 5min；

10ECL顯色：將膜取出放入混勻的ECL顯色液中，孵育3min，將膜取出貼在有熒光角標的膠片上，迅速用保鮮膜包好；

11曝光：把底片放在暗盒中，根據(jù)熒光強度分別對X光膠片作不同時間段的曝光，曝光結(jié)束后，將底片取出，1min顯影，30s清洗，1min定影，30s清洗，晾干；

12結(jié)果分析：用掃描儀將曝光后的X光膠片掃描，做后續(xù)結(jié)果分析。

選擇適當?shù)募毎臃N濃度。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細胞長滿時約有105個細胞。但由于不同細胞貼壁后面積差異很大，因此，在進行MTT試驗前，要進行預(yù)實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數(shù)和培養(yǎng)時間，以保證培養(yǎng)終止致細胞過滿。這樣，才能保證MTT結(jié)晶形成酌量與細胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否則細胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。

注意:細胞株的生物等級，由于有些細胞株及菌株屬于管制品，所以從國外購貨比較麻煩。

形態(tài)學(xué)改變:細胞體積明顯增大,為成熟淋巴細胞3-4倍。核膜清晰,核染色質(zhì)疏松呈網(wǎng)狀。核內(nèi)見明顯核仁1-4個。胞漿豐富,嗜堿性,有偽足樣突出。胞漿內(nèi)有時可見小空泡。

細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。

素爾細胞庫ATCC/ScienCell細胞培養(yǎng)技術(shù)|細胞培養(yǎng)基 *的ATCC細胞，ATCC傳代細胞，sciencell細胞，sciencell原代細胞，細胞培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)技術(shù)，原代細胞培養(yǎng)，動物細胞培養(yǎng)，植物細胞培養(yǎng)提供者。 細胞培養(yǎng)基 主要經(jīng)營品牌有ATCC，ScienCell，DSMZ，ALLCELLS，DV Biologics，Stemgent等，其中ATCC/ScienCell細胞zui為，傳代細胞，復(fù)蘇細胞，第二代細胞等，價格優(yōu)惠，買的放心，做實驗也放心，歡迎訂購！

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確保細胞到每一位用戶手里都是狀態(tài)

在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細胞發(fā)生凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。在細胞發(fā)生凋亡時，膜磷脂酰絲氨酸外翻的發(fā)生早于細胞核的變化，而此時Propidium Iodide（PI）不能通過細胞膜。

細胞壞死時，雖然也會發(fā)生磷脂酰絲氨酸外翻，但此時細胞膜的通透性明顯增加，PI等核酸染料進入細胞與細胞核中的核酸結(jié)合，發(fā)出紅色熒光。所以Annexin V-FITC(綠色熒光)常與鑒定細胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，來區(qū)分凋亡細胞與死亡細胞。

技術(shù)原理及步驟

1. 離心收集細胞，微量離心機轉(zhuǎn)速1000 rpm，離心時間5 min，棄培養(yǎng)基。

2. 用冷PBS洗滌細胞兩次。

3. 用400 L1 Binding Buffer懸浮細胞，濃度大約為1 106 cells/mL。

4. 在細胞懸浮液中加入5 lLAnnexin V-FITC，輕輕混勻后于2~8 C避光條件下孵育15min。

5. 加入10 L PI后輕輕混勻于2~8 C避光條件下孵育5 min。

6. 在1小時內(nèi)用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。

應(yīng)用實例

應(yīng)用領(lǐng)域

細胞的早期凋亡及區(qū)分凋亡與壞死細胞

服務(wù)周期

我公司在正式接受實驗委托2個星期左右完成實驗并提供實驗報告。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

需提供細胞類型，處理條件。

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細胞株細胞系

英文名稱

中文名稱

價格

NFS-60

NFS-60細胞

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Human bel7402

人肝癌細胞系

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Human Dul45

人前列腺癌細胞

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Human WRO

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Human ARO

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Human panc28

人胰腺癌細胞

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human PNT1A

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mouse N3

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human MCF10A

人正常乳腺上皮細胞

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BT549

人乳腺細胞

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CaCo2

人結(jié)腸腺癌細胞

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SGC7901

人胃癌細胞

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HCT116

人結(jié)腸癌細胞

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MC3T3-L1

小鼠胚胎成纖維細胞

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C3H10

小鼠間充質(zhì)干細胞系

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HCT8

人結(jié)腸癌細胞

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MGC-803

人胃癌細胞系

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ACDC5

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293Ampho

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2HO-MEF

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ATDC5日本

ATDC5

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SL4

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HMEC-1

人微血管內(nèi)皮細胞株

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Hut78

人T淋巴細胞白血病細胞

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SNU-398

人肝癌細胞

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SNU-449

人肝癌細胞

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SNU-475

人肝癌細胞

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Y79

人視網(wǎng)膜母細胞瘤

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AML12 

小鼠肝細胞

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HA-VSMC

人主動脈血管平滑肌細胞

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A-204

人橫紋肌肉瘤細胞

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PL45

人胰腺導(dǎo)管腺癌細胞

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Panc 10.05

人胰腺癌細胞

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NCI-H508 [H508]

人結(jié)腸直腸腺癌

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SK-N-DZ

人成神經(jīng)瘤細胞-骨髓

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NCI-H441 [H441]

人肺腺癌細胞

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WM-266-4

人黑素瘤細胞

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HT-1376

人膀胱癌細胞

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RWPE-2

人正常前列腺上皮細胞

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COLO 320HSR

人結(jié)腸癌細胞

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Ramos（RA1）

人B淋巴細胞

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T98G [T98-G]

人多形性惡性膠質(zhì)瘤

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T2(174 CEM.T2)

人淋巴母細胞

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BE(2)-C

人神經(jīng)母細胞瘤細胞

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KYSE-450

人食管癌細胞

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JF-305

人胰腺癌細胞

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EAhy926

人臍靜脈融合細胞

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NCI-h1688

人經(jīng)典小細胞肺癌細胞

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EC9706

人食管癌細胞

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HT1080

人纖維肉瘤細胞

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Pfeiffer

人彌漫性大細胞淋巴瘤B淋巴細胞

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3AO

人卵巢癌細胞

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PLA-802

人惡性橫紋肌肉瘤

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CA46

人淋巴瘤細胞

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GP2-293

人胚腎上皮包裝細胞

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LM3

高轉(zhuǎn)移人肝癌細胞

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MHCC97-H

高轉(zhuǎn)移人肝癌細胞 

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低轉(zhuǎn)移人肝癌細胞

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HSF

人皮膚成纖維細胞

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G422

小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

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BALL-1

人B淋巴細胞急性白血病細胞

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Hep 3B-s3

人宮頸癌細胞

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HMC

人腎小球系膜細胞

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MDCK (NBL-2)

馬-達二氏犬腎細胞系

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豬鼻甲黏膜成纖維細胞

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小鼠胰腺癌細胞

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DSL-6A/C1

大鼠胰腺癌細胞

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SP2/MIL-6

小鼠骨髓瘤B淋巴細胞

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DI TNC1

大鼠腦間質(zhì)細胞

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大鼠回腸細胞

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Sp2/0-Ag14

小鼠骨髓瘤細胞

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JB6 Cl 30-7b

小鼠表皮細胞

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WB-F344

大鼠肝上皮樣干細胞

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大鼠垂體瘤細胞

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大鼠正常肝細胞

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豬腎細胞系

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Bv-2

小鼠小膠質(zhì)瘤細胞

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大鼠肝星形細胞

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J774A.1

小鼠單核巨噬細胞

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SV40-MES-13

小鼠腎小球系膜細胞

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L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)

小鼠淋巴瘤細胞

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MA-891

小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞

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Marc145

猴腎細胞

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ROS1728

大鼠成骨細胞

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B16F1

小鼠黑色素瘤細胞

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MKN-45 胃癌

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Hep 3B-mock

轉(zhuǎn)染了microRNA-mock基因的陰性對照細胞

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GT1.1 /GT1-1

小鼠垂體瘤細胞

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BNP-9

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mouse podocyte

腎小球足細胞

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AR42J

大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞

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人肺腺癌細胞

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MKN-74

胃癌細胞

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人食管癌細胞

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人食管癌細胞

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LTEP- -2細胞

人肺腺癌細胞

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人乳腺癌細胞（耐藥）

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人卵巢癌細胞

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人卵巢癌細胞

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人卵巢癌細胞（耐藥）

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人滋養(yǎng)細胞

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NCI-H295R

人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞

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H4-II-E-C3

大鼠肝癌細胞

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ARPE-19

人視網(wǎng)膜色素上皮細胞

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RGC-5

小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞株細胞

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NCI-h1688

人經(jīng)典小細胞肺癌細胞

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BEAS-2B

人支氣管上皮細胞

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RPMI 8226

人多發(fā)性骨髓瘤細胞

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K562/ADP

K562耐阿霉素細胞株

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BEND.3

小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株

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MHCC97-H

高轉(zhuǎn)移人肝癌細胞

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低轉(zhuǎn)移人肝癌細胞

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CmESCs-11

小鼠胚胎干細胞

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U87 MG

人惡性膠質(zhì)瘤細胞

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小鼠淋巴瘤細胞(NK靶細胞)

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ECA109

人食管癌細胞

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HO8910

卵巢癌

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HO8910PM

卵巢癌

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INS-1

大鼠胰島素瘤細胞

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NCTC 1469

小鼠正常肝細胞

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小鼠胚胎纖維細胞

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PT-67

小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝株

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MeT-

人膜間皮細胞

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子宮內(nèi)膜癌

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人正常乳腺細胞

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SGC-7901/DDP

人胃癌耐藥順鉑細胞株

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人骨髓瘤細胞

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人腺癌細胞

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Tsu-Pr1

人非雄激素依賴型前列腺癌細胞

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人急性淋巴母細胞白血病細胞

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Patu 8988

人胰腺癌細胞

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人鼻咽癌細胞

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人B淋巴瘤細胞

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